药对知母/黄柏中知母有效成分芒果苷的吸收动力学研究

摘要

背景：
　　药对是中药复方配伍中最简单、最基本的用药形式，药对配伍的研究是探究复方配伍与吸收的关系重要切入点。本研究以经典药对知母/黄柏中知母有效成分芒果苷为研究对象，通过考察芒果苷在体内的吸收动力学特征和肠吸收特性，并与知母单煎液和知母/黄柏药对合煎液比较，探讨知母、黄柏配伍对芒果苷吸收动力学的影响，阐释知母/黄柏药对的配伍机制，为应用知母/黄柏药对的临床应用的物质基础研究提供工作基础和理论依据。
　　目的：
　　1.建立同时测定知母/黄柏药对中活性成分芒果苷、新芒果苷和盐酸小檗碱超高效液相色谱(UPLC)方法，考察知母/黄柏配伍及煎煮方法对3种成分煎出量的影响，并控制煎液批间组成成分的稳定性。
　　2.建立液相色谱-质谱联用（LC/MS/MS）法测定芒果苷在大鼠血浆中的浓度，考察知母配伍黄柏对有效成分芒果苷在大鼠体内药物动力学的影响。
　　3.采用大鼠在体肠循环灌流实验模型和缚管翻转肠囊模型研究知母/黄柏药对中有效成分芒果苷的肠吸收动力学特征。
　　方法：
　　1.芒果苷、新芒果苷和小檗碱含量测定方法学的建立：采用UPLC色谱系统，ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm，1.7μm)，流动相为0.1%磷酸(三乙胺调 PH=3.0)-乙腈，梯度洗脱（乙腈：0 min为5%,5.5min为18%,8 min为42%），流速0.25 mL·min-1，柱温35℃，检测波长260 nm。
　　2.芒果苷血药浓度的测定及体内药物动力学研究：采用日本资生堂CAPCELL PAK C18柱（150×2.0mm,5μm）；流动相为甲醇-乙腈-1%乙酸（40:3:57）；流速250μL·min-1；柱温为室温；用电喷雾离子化和正离子多离子反应监测（MRM）方式检测芒果苷；SD大鼠随机分为6组，分别单次灌胃芒果苷单体17.5、35、70 mg·kg-1、知母单煎液、知母-黄柏（1:1）合煎液和知母-黄柏（1:3）合煎液，测定血浆中芒果苷浓度，用DAS软件根据非房室模型法计算药物动力学参数。
　　3.芒果苷在体肠吸收特性的研究：采用大鼠在体肠循环灌流模型，利用超高效液相色谱法（UPLC-TUV）和紫外分光光度法（UV）分别测定肠液中芒果苷和酚红的浓度，考察芒果苷单体和知母、知母/黄柏药对中芒果苷在大鼠肠道的吸收特征。
　　4.翻转肠囊法研究芒果苷在大鼠小肠内吸收的动力学特征：采用 UPLC-TUV法测定芒果苷的浓度，通过缚管翻转肠囊实验研究芒果苷单体、知母水煎液和知母/黄柏水煎液中芒果苷的吸收动力学差异。
　　结果：
　　1.芒果苷、新芒果苷和小檗碱含量的测定：芒果苷、新芒果苷和小檗碱分别在3.44～220.00，3.75～240.00，9.76～625.00μg·mL-1内线性关系良好(r≥0.9999)，平均回收率分别为(95.00±3.28)％，(96.45±1.26)%和(97.78±4.84)％。
　　2.芒果苷血药浓度的测定及体内药物动力学研究：芒果苷的线性范围为3.01-601.2 ng·mL-1；方法回收率在100.5%～104.0%；日内和日间精密度均<9.1%。芒果苷单体17.5、35、70mg?kg-1给大鼠灌胃后，Cmax和AUC增加但与剂量的增加不成比例且数值较低，表面芒果苷单体吸收较差。知母单煎液组芒果苷血药浓度比单体组明显升高，配伍黄柏后有所下降。大鼠单次灌胃芒果苷单体（35mg?kg-1）、知母单煎液、知母-黄柏（1:1）和（1:3）合煎液后的主要药动学参数AUC0-t分别为0.626、122.4、94.36、53.97μg·mL-1·h，Cmax分别为0.149、21.52、16.26、8.27μg·mL-1，Tmax分别为1.0、3.0、4.0、6.0 h，t1/2Z分别为3.41、1.46、1.65、1.77 h。
　　3.芒果苷在体肠吸收特性的研究：芒果苷浓度为2.0，5.0，10.0，20μg·mL-1时，吸收速率常数（Ka）分别是0.0541，0.0467，0.0491，0.0220 h-1，吸收百分率（P）分别是14.05%，13.14%，12.43%和5.82%；随PH升高，Ka和P依次增加；芒果苷在肠段内吸收存在差异，各肠段的吸收速率常数按结肠、十二指肠、回肠和空肠依次下降；知母和知母/黄柏水煎液组中，肠循环液中新芒果苷含量的下降和芒果苷含量的上升呈同步变化。
　　4.翻转肠囊法研究芒果苷在大鼠小肠内吸收的动力学特征：大鼠肠外翻试验中，芒果苷在空肠、回肠和结肠的表观渗透系数（Papp）分别是2.0350×10-4,5.1788×10-4,3.3825×10-4 cm·min-1；知母水煎液组和知母-黄柏水煎液组中，其成分芒果苷在空肠的表观渗透系数（Papp）分别是18.363×10-4,4.1063×10-4cm·min-1,在回肠的表观渗透系数（Papp）分别是10.190×10-4,3.9650×10-4cm·min-1。
　　结论：
　　1.知母黄柏等量配伍时芒果苷或小檗碱的含量与知母或黄柏单煎相比基本相同或更高，两药合煎小檗碱的含量比煎后合并更高，等量配伍共煎更有助于有效成分的提取。本方法简便、快速、准确，可用于同时测定芒果苷、新芒果苷和小檗碱的含量。
　　2.该方法准确、灵敏、特异、简便，适用于鼠血浆芒果苷测定。芒果苷单体给药后药物吸收较快，但血药浓度水平较低。知母单独（知母单煎液）给药后，芒果苷血药浓度和AUC显著升高，达峰时间Tmax延长至3h，半衰期t1/2Z缩短，配伍不同比例黄柏后，t1/2Z没有显著性变化，但血药浓度和AUC明显下降，Tmax延长。
　　3.在体肠吸收实验中，芒果苷在2～10μg·mL-1，符合一级吸收动力学，主要表现为被动扩散机制，当浓度为20μg·mL-1时，芒果苷在大鼠小肠段的吸收存在高浓度饱和现象；在结肠、十二指肠吸收好于回肠，空肠吸收最差；在小肠内的吸收随着肠循环液pH值的增加而增加；知母水煎液组中，随着灌流时间的增加，肠液中芒果苷含量逐渐增多、新芒果苷含量逐渐减少。
　　4.翻转肠囊实验中，芒果苷在空肠内的吸收最差，在回肠内吸收显著好于空肠（P<0.05），总趋势为回肠>结肠>空肠。芒果苷单体组和知母/黄柏组给药中，其成分芒果苷在肠中的表观渗透系数无明显变化，知母组中芒果苷的表观渗透系数显著增加。

目录

声明

引言

第一章 文献研究

1 药物吸收动力学研究方法及在中药中的应用

2 知母-黄柏药对的配伍规律及研究

3 芒果苷吸收动力学的研究现状

第二章 知母/黄柏药对中小檗碱、新芒果苷和芒果苷的含量测定

1 仪器与试药

2 方法与结果

3 讨论

第三章 LC/MS/MS法测定鼠血浆中芒果苷浓度

1 仪器与试药

2 方法与结果

3 讨论

第四章 知母黄柏配伍对芒果苷大鼠体内药物动力学的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第五章 芒果苷的大鼠在体肠吸收动力学研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第六章 翻转肠囊法研究芒果苷在大鼠小肠内的吸收行为

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

结语

参考文献

附录

研究生在学期间发表论文情况

致谢