CD95/CD95L促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和炎症的作用

摘要

目的:CD95(Fas/Apo-1)和其配体CD95L或者活化性抗体相互作用后除了能够触发细胞的凋亡，还可促进细胞增殖、迁移和细胞因子的产生,同时CD95介导的凋亡在RA滑膜中是存在缺陷的。本文主要研究CD95/CD95L对类风湿关节炎的滑膜成纤维细胞增殖以及炎症反应的影响，初步探讨PI3K/Akt信号转导通路在此过程中的作用，为进一步揭示RA发病的分子机制和寻找新的基因治疗靶点提供理论依据和实验基础。
　　方法:免疫组化检测RA和OA滑膜组织石蜡标本中CD95蛋白的表达；TUNEL法检测RA滑膜组织的凋亡情况；培养RASFs和OASFs细胞，于第3代至第7代用于实验；流式细胞仪检测细胞CD95的表达和细胞自发凋亡情况。CD95活化性抗体、CD95 siRNA和PI3K抑制剂LY294002分别作用于RASFs后，CCK-8法检测细胞的生长增殖情况；RT-PCR法检测IL-6水平；Western Blot检测Akt总蛋白以及pAkt蛋白表达。
　　结果:
　　1.免疫组化结果发现CD95的表达阳性率在RA滑膜组织中较OA明显增高，RT-PCR结果显示RASFs的CD95 mRNA表达水平较OASFs高，流式细胞术结果显示RASFs的CD95表达率也比OASFs较高，经统计学处理，差异有统计学意义(P﹤0.05)；而TUNEL法和流式细胞术发现细胞凋亡不明显。
　　2.CD95活化性抗体刺激RASFs，发现低剂量的活化性抗体（0ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,500ng/ml,750ng/ml）作用后促进细胞的生长增殖和炎性细胞因子IL-6的表达(P﹤0.05)，高剂量的(1000ng/ml)可诱导细胞凋亡(P﹤0.05)。RASFs转染CD95 siRNA后，可抑制CD95活化性抗体对细胞的增殖和炎症反应的促进作用。
　　3.利用Western blot证实了CD95活化性抗体作用于RASFs后可磷酸化Akt，在30分钟时最为显著；给予PI3K通路抑制剂LY492002能有效阻断活化性抗体对细胞增殖和炎症因子分泌的促进作用(P﹤0.05)。
　　结论:CD95L刺激CD95后可促进RASFs的增殖和炎性因子的表达，其机制可能与PI3K/Akt信号转导通路的激活有关。

目录

声明

引言

第一部分 CD95在类风湿关节炎患者中的表达

1. 材料

2. 方法

3. 实验结果

4. 讨论

第二部分 CD95活化性抗体对RASFs增殖和促炎反应的作用

1. 材料

2. 方法

3.结果

4. 讨论

第三部分 PI3K/Akt信号通路介导CD95/CD95L非凋亡机制的探讨

1.材料

2. 方法

3. 实验结果

4. 讨论

结语

一、论文研究成果

二、不足之处

三、下一步工作设想

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢