南药巴戟天糖类成分分析及其质量评价研究

摘要

目的：为提高巴戟天药材质量，对巴戟天的科学种植、采收、加工以及临床用药方面提供有益的参考，本文通过建立巴戟天糖类成分的高效薄层色谱指纹图谱、高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法色谱指纹图谱及多指标成分的含量测定方法，分别对不同巴戟天混伪品，不同药用部位、不同产地、野生与栽培、不同肥料处理、不同生长年限、不同直径的巴戟天，不同巴戟天饮片以及含巴戟天的复方制剂的质量进行评价，以构建南药巴戟天糖类成分的质量评价体系。
　　方法：在建立巴戟天糖类成分的高效薄层色谱方法时，以乙酸乙酯-甲醇-水-冰乙酸（第一次：8:3:2:3；第二次12:3:2:3）为展开剂，在20～32℃和40%～55%温湿度条件下，二次展开，展距均为13 cm，取出，晾干，喷以α-萘酚试液，105℃加热至斑点显色清晰，立即于可见光下检视。
　　巴戟天高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法色谱指纹图谱及多指标成分的含量测定方法如下，色谱柱：Hamilton RCX-10 column(250 mm×4.1 mm)；洗脱液：A为100 mMNaOH溶液；B为100 mMNaOH溶液﹢500 mMNaAc溶液；流速：0.8 mL/min；柱温：35℃；进样量：25μL；梯度洗脱条件：0～5 min，1%B；5～15 min，1～9%B；15～20 min，9～12%B；20～25 min，12～16%B；25～40 min，16～50%B；40～43 min，50% B；43～46 min，50～1% B；检测器波形（时间程序）为戴安公司推荐的糖类化合物分析模式。
　　采用CHROMAP1.5色谱指纹图谱系统解决方案软件（珠海科曼中药研究有限公司），对不同巴戟天，不同混伪品，含巴戟天的复方制剂样品的指纹图谱结果进行分析与比较，并通过该软件自带的数理统计学方法即相似度评价、主成分分析、聚类分析对不同处理组的巴戟天样品进行数据处理。
　　结果：
　　1、巴戟天糖类成分的高效薄层色谱指纹图谱研究。采用高效薄层色谱方法，对采集自GAP基地的10批巴戟天药材进行指纹图谱研究，最终建立了由11个共有峰组成的巴戟天糖类成分高效薄层色谱指纹图谱。通过与各对照品的Rf值和颜色比对，指认了其中的5个蓝色斑点，分别为果糖、蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖。
　　通过与对照品果糖、蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖的Rf值比对，在高效薄层图谱中，混伪品鸡眼藤仅检测出果糖，羊角藤与假巴戟则未检测出任何糖。巴戟天、鸡眼藤、羊角藤以及假巴戟与巴戟天共有模式比较所得的相似度分别为0.9992、0.1725、0、0；巴戟天、制巴戟、巴戟肉与盐巴戟4种巴戟天饮片能检测到以上5种糖，但是制巴戟、巴戟肉以及盐巴戟的果糖斑点较生巴戟颜色深；巴戟天口服液X在蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖糖斑点处检测无干扰，与制剂生产投料药巴戟肉图谱很相似，3批制剂相似度在0.4244～0.4516之间，而与阴性对照区分开来。
　　2、巴戟天糖类成分的高效阴离子交换色谱-脉冲安培法色谱指纹图谱研究。由10批产于广东巴戟天GAP基地的巴戟天样品建立了巴戟天高效阴离子交换色谱-脉冲安培法色谱指纹图谱。该指纹图谱由21个共有峰组成，通过与对照品葡萄糖、果糖、蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖的保留时间比对，指认了其中的6个糖类成分。
　　混伪品相对于巴戟天共有模式的相似度都小于0.37。鸡眼藤中的葡萄糖、果糖峰表观丰度较高，而羊角藤与假巴戟虽有葡萄糖与果糖峰，但表观丰度很低；巴戟天须根、木心以及根皮的糖类成分在组成上基本一致，但在比例上有明显差异，单糖以及寡糖是差异的主要来源；广东巴戟天与福建、海南巴戟天具有一定的差异，并且与广西巴戟天差异最大；从野生与栽培巴戟天的相似度结果可知，其相似度都达到0.95以上，说明在糖类成分的组成与比例上，野生巴戟天与家种巴戟天很相近；在5种不同施肥方案的巴戟天样品中，3个空白肥料样品聚为一小类，而其他肥料组均未能按照相同的肥料处理方式聚合，提示各肥料组间的巴戟天样品差异较小，而5组施肥组的巴戟天样品与空白对照组的巴戟天样品差异较大；在1~6年生巴戟天样品中，1年生巴戟天的相似度最低，为0.9057，而2~6年生的巴戟天相似度均高于0.97。聚类分析结果提示在糖类成分的组成与比例上，3~4年生的巴戟天样品相近，2年生与5~6年生的巴戟天样品较为接近，而都与1年生的巴戟天样品差别大；同一株根系上不同直径（为大、中、小3个等级）的巴戟天的相似度都大于0.96，说明在糖类成分的组成与比例上3个等级的巴戟差异不大；生巴戟与制巴戟、巴戟肉以及盐巴戟图谱具有显著的差异，生巴戟中的单糖、双糖类成分峰的表观丰度较小，而寡糖、多糖类成分的峰表观丰度较大；而制巴戟、巴戟肉以及盐巴戟则相反，并且在图谱上出现了一系列新的色谱峰。
　　3、巴戟天糖类成分高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法色谱的定量研究。葡萄糖、果糖、蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖和1F-果呋喃糖基耐斯糖6个糖类成分与相邻色谱峰之间的分离度均大于1.5，理论塔板数均大于3900；加样回收率为99.07%～103.18%；精密度、重复性以及稳定性实验的RSD均在5%以下，表明该含量测定方法准确可行。
　　鸡眼藤中的葡萄糖与果糖含量很高，4个寡糖成分的含量很低。羊角藤和假巴戟中都含有葡萄糖和果糖，但仅有羊角藤中的葡萄糖含量达到了定量限；所有巴戟天木心与须根样品中糖类成分含量均比根皮中的低，约为根皮中的1/2，但含量均在2%以上；21批广东巴戟天与11批非广东巴戟天在6个糖类化合物含量差异具统计学意义，而非广东的3省巴戟天之间无显著性差异；栽培巴戟天中寡糖含量比野生品高；5组施肥组巴戟天在葡萄糖与1F-果呋喃糖基耐斯糖含量上与空白肥料对照组之间均存在显著性差异,而5组肥料组之间在6个糖类成分的含量上均不存在显著性差异；3年生巴戟天中巴戟天寡糖含量最高，3.5~4年生巴戟天稍小，5年生、6年生、2年生次之，1年生最低；中等直径巴戟天寡糖含量最高，大直径最低，小直径居中；经过加热处理的巴戟天饮片，即制巴戟、巴戟肉、盐巴戟中葡萄糖与果糖的含量明显高于生巴戟，而耐斯糖与1F-果呋喃糖基耐斯糖的含量显著低于生巴戟。
　　结论：本研究建立了巴戟天糖类成分高效薄层色谱指纹图谱、高效阴离子交换色谱-脉冲安培法色谱指纹图谱以及6个糖类化合物的含量测定方法，是对现有的巴戟天质量评价体系的重要补充。运用已建立的方法从多个方面评价了不同条件下的巴戟天药材质量，为确定巴戟天的道地产区、药用部位、栽培方式、采收年限、加工方式提供了理论依据，同时探讨了巴戟天混伪品与巴戟天、4种巴戟天饮片在糖类成分上的本质差异，以及对含巴戟天的口服液X进行了初步的质量评价研究。

目录

声明

引言

第一章 文献研究

第一节 巴戟天的研究现状

第二节 HPAEC-PAD分析糖类成分的研究进展

第三节 本论文的研究目的、内容及意义

第二章 巴戟天糖类成分的HPTLC指纹图谱研究

一、仪器和试药

二、实验方法

三、实验结果

四、小结与讨论

第三章 巴戟天糖类成分的HPAEC-PAD指纹图谱研究

一、仪器和试药

二、实验方法

三、实验结果

四、小结与讨论

第四章 巴戟天糖类成分的HPAEC-PAD定量研究

一、仪器和试药

二、实验方法

三、实验结果

四、小结与讨论

结语与展望

结论：

展望：

参考文献

附录

研究生在学期间发表论文情况

致谢