丹参注射液对激素诱导的OB-OC共育体系中成骨细胞凋亡的影响

摘要

目的：了解不同浓度激素对共育系统中成骨细胞凋亡的影响，探讨激素性股骨头坏死与激素诱导的细胞凋亡的相关性及激素性股骨头坏死可能的发病机制，研究丹参注射液对激素处理后的OB-OC共育体系中成骨细胞保护作用，了解其在激素性股骨头坏死治疗及预防中的效果和可能的作用机制，为临床研究的开展提供实验依据和理论支持。
　　方法：建立OB-OC共育体系，MTT法及流式细胞仪法确定最佳激素诱导浓度，通过研究不同浓度的丹参注射液干预经激素处理后的OB-OC共育体系，RT-PCR法分别检测凋亡蛋白bax、bcl-2及caspase-3 mRNA的表达，分析比较各组数据的差异，所得数据应用SPSS17.0统计软件统计分析。
　　结果：⑴成骨细胞生长抑制率随着各组地塞米松浓度的增加而升高，差异有统计学意义（P<0.05），各组别细胞增殖抑制率随着地塞米松干预时间（12h、24h、36h）的延长而升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。细胞凋亡率随着各组地塞米松浓度的增加而升高，差异有统计学意义（P<0.05）。⑵各浓度丹参注射液+10-5地塞米松组细胞生长抑制率、细胞凋亡率随着丹参注射液浓度的增加而降低，差异有统计学意义（P<0.05）。⑶在各浓度丹参注射液+10-5地塞米松组, caspase-3、bax、bcl-2 mRNA的表达经方差齐性检验均具有方差齐性（P>0.05），LSD-t检验进行两两比较结果显示：bcl-2 mRNA的表达随着各组别丹参浓度的增加而增加，差异有统计学意义（P<0.05）；bax mRNA的表达随着各组别丹参浓度的增加而减少，除外0.15%丹参+10-5地塞米松组与对照组没有差异（P>0.05），其余组别差异均有统计学意义（P<0.05）；caspase-3 mRNA的表达随着各组别丹参浓度的增加而减少，除外0.10%丹参+10-5地塞米松组与对照组没有差异外（P>0.05），其余组别差异均有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：①高剂量激素与细胞凋亡明确相关，且呈浓度相关性，浓度越高，细胞生长抑制率、细胞凋亡率越高。②高剂量激素状态下，bcl-2基因下调，促细胞凋亡的bax基因、caspase-3基因表达上调，导致成骨细胞凋亡，从而导致成骨细胞减少，促进股骨头骨坏死的发生。③丹参注射液是拮抗激素诱导的细胞凋亡有效药物，可能对治疗及预防激素性股骨头坏死有积极作用。

目录

声明

引言

第一章 文献研究

第一节 祖国医学对激素性股骨头坏死的认识

一、对激素性股骨头坏死病名的认识

二、病因病机

三、治则治法

第二节 现代医学对激素性股骨头坏死的认识

一、流行病学研究

二、股骨头血液供应特点

三、激素性股骨头坏死的发病机制

四、激素性股骨头坏死发病机制中细胞凋亡的研究

五、丹参注射液在治疗激素性股骨头坏死中的作用

第二章 实验研究

第一节 成骨细胞和破骨细胞共育模型的建立

一、主要试剂及器材

二、小鼠OB株MC3T3-E1的培养及鉴定

三、小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7的培养、诱导及破骨细胞的鉴定

四、成骨细胞和破骨细胞共育体系的建立

一、不同浓度地塞米松处理成骨细胞生长抑制率测定

二、不同浓度地塞米松处理共育体系内成骨细胞凋亡率测定

三、不同浓度丹参注射液+地塞米松处理成骨细胞生长抑制率测定

四、不同浓度丹参注射液+地塞米松处理共育体系内成骨细胞凋亡率测定

五、RT-PCR测定caspase-3、bal-2、bax mRNA的表达

六、统计方法

第三节 研究结果

一、小鼠OB株MC3T3-E1的培养及鉴定结果

二、小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7的培养、诱导及破骨细胞的鉴定结果

三、不同浓度地塞米松组成骨细胞生长抑制率测定结果：

四、不同浓度地塞米松组成骨细胞凋亡率测定结果

五、不同浓度丹参注射液+10-5地塞米松组成骨细胞生长抑制率测定结果

六、不同浓度丹参注射液+10-5地塞米松组成骨细胞凋亡率测定结果

七、实时荧光定量PCR结果

第三章 讨 论

第一节 建立共育体系的意义及方法

第二节 激素对成骨细胞凋亡的影响

第三节 激素对股骨头坏死的可能作用机制

第四节 丹参注射液在预防和治疗激素性股骨头坏死中的作用

第四章 结 语

参考文献

致谢