TNF-α对共育体系中成骨细胞凋亡的影响及益骨胶囊含药血清的保护作用

摘要

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对成骨-破骨细胞共育体系中成骨细胞(OB)凋亡的影响及益骨胶囊含药血清的保护作用.方法:(1)将20只10月龄SD大鼠随机分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水灌胃组,制备含药血清与空白血清;(2)将分离的OB与破骨细胞(OC)分别接种到共育体系中,加培养液培养后,同时添人20 μg/L、30 μg/L,40 μg/L、50 μg/L、60 μg/L TNF-α分别作用24 h、48 h、72 h诱导OB凋亡,用DNA电泳法确定最佳诱导方案;(3)将细胞分为TNF-α组、TNF-α+含药血清组、TNF-α+空白血清组和正常对照组,分别加入DMEM培养液、含药血清培养液、空白血清培养液、DMEM培养液,除正常对照组加入PBS外,其它各组均同时加入60 μg/L TNF-α,培养72 h后,用荧光染色法、DNA电泳法、流式细胞仪观察各组OB凋亡情况.结果:(1)60 μg/L TNF-α作用72 h后,共育体系中OB DNA电泳呈较典型的梯形改变;(2)TNF-α+含药血清组中OBDNA电泳仅出现二个条带,荧光染色可见大多数细胞均匀染色,其凋亡率(9.60%±0.26%)明显低于TNF-α组(26.90%±0.06%)与TNF-α+空白血清组(18.10%±0.06%),P＜0.01.结论:60 μg/L TNF-α作用72h可诱导共育体系中OB凋亡;益骨胶囊含药血清对TNF-α诱导的OB凋亡具有抑制作用.