猪脂肪间充质干细胞分离、鉴定及联合扩张器建立乳房重建模型的研究

摘要

目的: 1.从五指山小型猪项背部皮下脂肪组织中分离提取脂肪间充质干细胞，进行体外培养原代脂肪间充质干细胞，传代、冻存，检测脂肪间充质干细胞表面抗原标记，诱导培养基诱导分化检测其分化特性; 2.肤软组织扩张器置入五指山小型猪腹部皮下，调整模型形状，塑造理想的乳房模型; 3.脂肪间充质干细胞，分次注入扩张器塑造的模型中，观察模型外形变化，观察局部细胞分化情况，，探讨脂肪间充质干细胞用于乳房重建的可行性，为脂肪间充质干细胞由基础到临床转化提供理论依据。 方法: 1.原代脂肪间充质干细胞:采用胶原酶消化法，从脂肪组织中分离提取原代脂肪间充质干细胞，通过干细胞培养基体外培养脂肪间充质干细胞，常规传代、冻存，检测脂肪间充质干细胞的稳定性，流式细胞仪检测脂肪间充质干细胞表面抗原标记，成骨、成脂诱导培养基诱导分化，油红O染色鉴定成脂分化结果，茜素红染色鉴定成骨诱导分化结果; 2.动物模型:全麻五指山小型猪，将10ml定制小型圆形皮肤扩张器置入腹部皮下，通过注射壶间断注入生理盐水，塑造理想的乳房模型; 3.脂肪间充质干细胞局部分化情况:每次从注射壶抽出部分扩张器内生理盐水并在扩张器表面的皮下脂肪组织内注入筛选的脂肪间充质干细胞，观察模型外形变化情况，免疫组化法镜下观察局部细胞分化情况。 结果: 1.1％的Ⅰ型胶原酶消化法可以从脂肪组织中分离提取出原代脂肪间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞表面抗原标记CD34、CD45阴性表达，CD44、CD105阳性表达，经历约2-3周诱导培养后，成脂诱导组镜下可见细胞内大量圆形脂滴形成，油红O染色显示脂滴着色呈橘红色;成骨诱导组可见大量结节形成，茜素红染色显示细胞内钙化结节形成; 2.注射壶向扩张器内定期分次注入生理盐水可以塑造出理想的乳房模型; 3.观察通过扩张器局部注入脂肪间充质干细胞后皮肤组织局部外形在短期内未见明显变化，免疫组化检测局部细胞分化情况可见局部脂肪细胞数目增多。 结论: 1.肪间充质干细胞可以成功从脂肪组织中分离提取并进行体外培养，流式细胞仪和分化结果显示脂肪间充质干细胞表达干细胞特性; 2.实验部分证实脂肪间充质干细胞可以根据局部微环境分化成为周围细胞的特性; 3.间充质干细胞有望成为乳房重建的种子细胞，但是脂肪间充质干细胞的分化的具体机制和安全性尚待进一步证实。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

第一节 脂肪间充质干细胞研究现状

一、细胞概况

二、脂肪间充质干细胞的研究现状

第二节 乳腺癌术后乳房重建的研究进展

一、乳腺癌的治疗现状

二、乳房重建的方式与时机选择

三、现行乳房重建术的不足

第三节 皮肤软组织扩张术的研究进展

一、皮肤软组织扩张术

二、皮肤软组织扩张术的研究进展

三、皮肤软组织扩张术在乳房重建中的应用

第二章 实验研究

第一节 猪脂肪间充质干细胞的分离、鉴定

一、仪器与试药

二、实验方法

三、实验结果

四、小结

第二节 建立动物模型

一、仪器与试药

二、实验方法

三、实验结果

四、小结

第三节 脂肪间充质干细胞注入动物模型

一、仪器与试药

二、实验方法

三、实验结果

四、小结

结语

参考文献

攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢