寒热证候大鼠大肠癌癌变过程肠上皮Vang1、Lg1和Podx1表达差异分析

摘要

目的:
　　而随着中医的发展，中药对大肠癌的防治作用也日益受到重视。中医的“辨证论治”原则要求对不同证型的发病机体给予不同的治疗方案。因此本研究旨在比较寒热两种证型下大肠癌启动过程肠上皮细胞极性特征的差异，以寻求不同证候宿体情况下肿瘤发生机制的可能差异。具体:探讨寒热两种证型大鼠大肠癌发病情况的差异，以及在寒热两种证型的基础上，观察大鼠大肠组织中肠上皮细胞Lgl、vangl和podocalyxin这三种极性蛋白的表达情况，同时了解上述3个极性蛋白的表达与大肠癌发病之间关系，以揭示Lgl、vangl和podocalyxin(Podxl)这3个蛋白在寒热两种证型大肠癌癌症发生发展的可能作用及其临床意义。
　　方法:
　　本研究将156只大鼠随机分为寒证模型组、热证模型组、热证中药组、寒证中药组各36只，空白组12只（雌雄各半）。热证模型组及热证中药组用浓度递增的辣椒素和乙醇混合水溶液灌胃5周，建立大鼠热证模型;寒证模型组及寒证中药组用冰水灌胃及冰水泡浴5周，建立大鼠寒证模型;建立模型后，予以DMH皮下注射1次/周，持续12周，热证中药组及寒证中药组分别予左金丸汤剂及反左金丸汤剂灌胃，1次/日，持续24周，期间继续寒热造模，热证模型改为乙醇灌胃，寒证模型改为冰水灌胃;实验第5周解剖大鼠36只，观察寒热模型造模情况，DMH注射12周后，每隔3周解剖24只，观察结肠癌发病情况及Lgl、podocalyxin和vangl这3个指标在结肠癌及正常结肠组织中的表达情况。
　　结果:
　　寒热模型造模后大鼠出现明显寒热证症状和体征，包括饮食量、体重和各种外部体征均出现了明显变化，在此基础之上建立肠癌模型造模后，大鼠肠道肿瘤发生明显;免疫组织化学检验及pcr检测等结果显示极性蛋白vangl、podocalyxin、Lgl在大肠癌癌组织中的表达与正常组织表达有明显差异，但是寒热两种证候模型间，3个极性蛋白在同组别的表达量没有明显区别。
　　结论:
　　1、以冰水灌胃和凉水泡浴的方法可以用于大鼠寒证模型的制作。
　　2、以辣椒素和乙醇溶液灌胃的方法可以用于大鼠热证模型的制作。
　　3、vangl、Lgl和podocalyxin在不同结肠组织中的表达量有明显差别，vangl、Lgl和podocalyxin对大肠癌的发生发展有密切联系。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

1．1 细胞极性相关研究

1．2 热证模型的研究

1．3 寒证模型的研究

1．4 寒热证候个体组织环境改变研究

1．5 大鼠大肠癌造模方法

第二章 寒热两种证候的模型构建研究

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 受试药物和试剂

2．1．3 药物处理

2．1．4 仪器和器材

2．2 实验方法

2．2．1 动物分组及给药

2．2．2 根据临床诊断方法，制定动物模型评定标准如下

2．2．3 大鼠的一般情况观察

2．2．4 统计学处理

2．3 实验结果

2．3．1 大鼠食量改变

2．3．2 大鼠饮水量

2．3．3 大鼠体重变化

2．3．4 大鼠粪便性状改变

2．3．5 大鼠外观改变

2．3．6 大鼠肛温改变

2．3．7 大鼠胃石蜡切片病理检查结果

第三章 大肠癌模型造模研究

3．1 实验材料

3．1．1 实验动物

3．1．2 受试药物和试剂

3．1．3 药物处理

3．1．4 仪器和器材

3．2 实验方法

3．2．1 动物分组和给药

3．2．2 统计学处理

3．3 实验结果

3．3．1 大鼠食量变化

3．3．2 大鼠饮水量变化

3．3．3 大鼠体重改变

3．3．4 大鼠肠道肿瘤发生情况

3．3．5 大鼠肠道病理图片

3．3．6 大鼠肠道电镜检测

3．3．7 大鼠肠道形态变化

第四章 大肠癌肠上皮在细胞极性的表达差异研究

4．1 材料

4．1．1 实验动物

4．1．2 实验试剂

4．1．3 仪器和器材

4．2 实验方法

4．2．1 免疫组织化学检验

4．2．2 光密度检测

4．2．3 聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction，PCR)检测

4．2．4 统计学处理

4．3 实验结果

4．3．1 肠道免疫组织化学检验及光密度检测

3．2．6 免疫组织化学检验光密度检测

3．2．7 肠道组织的PCR检测

3．2．8 大鼠肠道性状对比

第五章 讨论

5．1 寒热证候造模相关讨论

5．2 大肠癌造模相关讨论

5．3 大肠癌发生在细胞极性方面的表达差异分析

5．4 总结

参考文献

附录

在学期间公开发表论文情况

致谢