“本虚”与“标实”大肠癌不同部位肠组织微环境CAF表达差异分析

摘要

目的:
　　随着中医的发展，中医药干预肿瘤微环境具有多环节，多途径，多靶点的优势，在肿瘤治疗中发挥其综合协同作用。全身或局部的气滞血瘀、痰凝、湿热、脾肾虚等是癌毒扩散和转移的良好土壤与环境——“稽留而不去，息而成积也”。因此本研究分析不同部位肠组织“标实”与“本虚”证肿瘤相关成纤维标记物表达差异，探索CAF相关标记物在大肠癌发生发展中的表达特征以及中医证候与CAFs的作用机制在肿瘤的发生发展中有无相关性联系。具体:探讨以脾虚证，气血两虚证为主的“本虚”证与湿热内蕴，瘀毒内阻，肝郁气滞为主的“标实”证两类证型大肠癌患者正常组织、癌旁组织、癌组织相关标记物表达的差异情况分析，以及在两类证型的基础上，观察临床大肠癌患者术后组织中肿瘤相关成纤维细胞α-SMA，FAP，S100A6和PDPN，SPARC这五种相关标记蛋白的表达情况，同时了解上述5个标记蛋白的表达与大肠癌发病之间关系，以揭示肿瘤相关成纤维细胞相关标记物在在“本虚”、“标实”两类证型大肠癌癌症发生发展的可能作用及其临床意义。
　　方法:
　　本实验目标为广州中医药大学第一附属医院肛肠科2015年4月-2016年9月期间的住院病人，入院初期先进行证候调查问卷，采集一般临床资料及其他所需信息资料。后经手术病理显示为结直肠癌肠的住院患者，此类患者符合调查对象，对不属于结直肠癌标准的剔除掉。最后对此期间所有符合条件的患者进行前瞻性的临床中医证候调查。观察一般流行病学资料及临床症状、体征、舌脉象，制定临床症候观察表，并请从事临床工作3年以上中级中医专家来把关，确定大肠癌患者证候分型。依照《中医肛肠科常见病诊疗指南》[1]中的相关诊断规范，并参考Dukes分期、AJCC/UICC TNM分期（2002年）大肠癌标准进行合理准确的分期。剔除不符合的相关诊断标准，诸如拥有心脑血管疾病、肝肾损害和其他造血系统疾病，有精神疾患影响中医证候的描述、判断的患者、以及最后资料不完整者也需剔除。手术前做到没有放化疗的病史，手术后病理结果确定为结直肠癌的患者纳入研究范围。以此进行病例筛选，如实填写临床症候调查表，归整数据，进行统计学分析。其中，男23例(51.1％)，女22例(48.9％);患者年龄41-82岁，平均年龄为62.2岁;病理分型以中分化腺癌为主，有淋巴结转移15例，无转移者30例。
　　对67例患者进行临床描述性分析，中医临床症状分析及舌脉象分析采用样本聚类分析方法，统计分析后，初步得出大肠癌早中期疾病证候诊断的证候类型，主要临床症状。四诊信息:出现频率＞15％的症状和体征26个，分别为神疲倦怠、头晕乏力、四肢困重、眠难、纳食减少、喜冷饮、口干舌燥、口渴不欲饮、口臭可闻、咽部梗塞不适感、口苦或黏、口淡口吐清涎、胸闷呕恶、腹部胀痛、腹部胀满、腰膝酸软、里急后重感、肛门坠胀不适、便不尽、便秘、黑便、大便黏滞不成型、黏液血便、怕冷、四肢不温、烦躁容易发怒、汗出。其中腹部胀痛、腹胀满、便不尽、黏液血便、里急后重、肛门坠胀不适为常见的新发症状和体征。出现频率＞15％的舌象5个，分别为舌红、舌苔腻、黄苔、苔白、苔厚。出现频率＞15％的脉象6个，分别为弦脉、滑脉和濡脉、数脉、沉脉、细脉。
　　结果:
　　对以上阳性症状群进行聚类分析，初步得出证候分型如下4种证型:瘀毒内结证，脾虚证，气血两虚证，湿热蕴结证。其中瘀毒内结与湿热蕴结归为“标实”证，其余2证归为“本虚”证。瘀毒内结证主要症状:腹痛，大便带血色紫暗，里急后重，排便困难，舌暗红，脉弦缓;湿热蕴结证主要症状:腹痛，赤白脓血便，里急后重感，胸闷恶心，纳差，舌质红苔黄腻，脉滑数有力;脾虚证主要症状:面色萎黄，怕冷，腹隐痛，泄泻次数增加，舌质淡，苔薄白，脉沉细无力;气血亏虚证主要症状:消瘦，面色苍白，气短不足，乏力，腹泻或便秘，腹部胀满，舌质淡，苔薄白，脉弱无力。
　　免疫组织化学检验及PCR检测“标实”与“本虚”证大肠癌不同部位肠组织CAF相关标记物，结果显示肿瘤相关成纤维细胞标记物α-SMA，FAP，S100A6和PDPN，SPARC在大肠癌癌组织中的表达与正常组织表达有明显差异(P＜0.05)，与癌旁组织表达差异不明显。但是“标实”与“本虚”两类证候间，5个蛋白在同组别的表达量没有明显区别。
　　结论:
　　1、参照相关诊断标准，制定大肠癌临床证候观察表，纳入中分化腺癌患者为观察对象。
　　2、运用聚类分析方法，把纳入标准分为瘀毒内结证，脾虚证，气血两虚证，湿热蕴结证。其中瘀毒内结与湿热蕴结归为“标实”证，其余2证归为“本虚”证。
　　3、肿瘤相关成纤维细胞标记物α-SMA，FAP，S100A6和PDPN，SPARC在不同肠患者肠组织中的表达量有明显差别，α-SMA，FAP，S100A6和PDPN，SPARC对大肠癌的发生发展有密切联系。
　　4、“标实”与“本虚”两类证候间，5个蛋白在同组别的表达量没有明显区别。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

1．1 古医家对肠癌病名的认识

1．1．2 古医家对肠癌病因、病机的认识过程

1．2 现代医家们对肠癌发病机制的相关认识

1．3 肠癌之中医证候相关探索研究

1．4 肿瘤微环境、肿瘤相关成纤维细胞与中医证候相关内在研究

第二章 临床研究

2．1 研究目的

2．2 研究对象

2．2．1 病例来源

2．2．2 病例纳入标准

2．2．3 病例纳入标准

2．3 研究方法

2．3．1 研究方案设计

2．3．2 调查问卷及内容

2．4 临床证候观察表制定及质量把控

2．5 统计学处理

2．6 调查研究结果

2．6．1 —般资料结果

2．6．2 大肠癌早中期患者症状和体征描述性分析

2．6．3 中医证型分析

第三章 大肠癌肿瘤相关成纤维细胞相关标记物在癌组织、癌旁组织、正常组织的表达差异研究

3．1 材料

3．1．1 实验对象

3．1．2 实验试剂

3．1．3 仪器和器材

3．2．1 免疫组化检验

3．2．2 实验结果

3．3 聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction，PCR)检测

3．3．1 引物设计

3．3．2 提取总RNA

3．3．3 逆转录反应

3．3．4 荧光定量PCR反应

3．3．5 统计结果如下

3．3．6 结果

3．4 统计学处理

第四章 临床上大肠癌“本虚”与“标实”证候相关研究讨论

4．1 一般临床资料调查分析

4．2 大肠癌临床症状和体征、证型分析

4．3 证候病理因素的分析

第五章 大肠癌肿瘤微环境中肿瘤相关成纤维细胞标记物在未来医疗中的作用相关讨论

5．1 肿瘤相关成纤维细胞在肿瘤发生发展中所起到的作用

5．2 有关肿瘤相关成纤维细胞标记物的研究情况

第六章 结语

参考文献

附录

在学期间公开发表论文情况

致谢