西藏绿萝花活性成分提取及对α-糖苷酶抑制作用的研究

摘要

糖尿病是一组由遗传因素及环境引起的临床综合症，是一种严重危害健康的常见慢性终身疾病，并且随着人们生活水平的提高，糖尿病等非传染疾病呈流行趋势，而且发病率呈现出年轻化趋势，成为21世纪人类健康的主要威胁之一。所以，糖尿病的积极预防和治疗对于人类的健康是有着非常重要的意义的。 西藏绿萝花为天南星科植物，产于西藏寒冷地带，喜马拉雅山脉，据记载，西藏绿萝花主治糖尿病、冠心病、高血压、高血脂、血管炎、脉管炎等。西藏当地居民通常将绿萝花作为治疗糖尿病、高血脂等慢性疾病的药物，泡水饮用。但是目前还没有西藏绿萝花的相关参考文献及研究报告。本文对西藏绿萝花的研究内容包括：绿萝花微波提取的工艺条件、绿萝花提取物的各个部分在体外对α-葡萄糖苷酶抑制作用以及对酶促动力学的研究，并且研究了绿萝花提取物对小鼠餐后血糖的影响。 首先，在对绿萝花微波提取工艺条件的研究中，考察了微波功率、提取时间和液料比对微波提取的影响，得到以下结论，在微波功率为450W、液料比为20、提取时间为12min的条件时，为最佳提取条件，此时，提取率到达20.9％，并且乙醇全提物浓度为0.8mg/ml时，对α-葡萄糖苷酶抑制率达到67.09％。直接加热提取，提取时间为90min，液料比为30时，提取率为18.95％，并且乙醇全提物浓度为0.8mg/ml时，对α-葡萄糖苷酶抑制率为54.27％，微波提取与直接加热提取方法比较，微波提取明显优于直接加热提取的效果。 其次，在对绿萝花提取物的各个部分在体外对α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究中发现，绿萝花70％乙醇提取物、PF相、EAF相、nBF相、WF相在配置成浓度为0.25mg/ml时，对酶的抑制率分别为：47.47％、20.16％、83.65％、11.53％、13.81％。阿卡波糖浓度为0.25mg/ml时对酶的抑制率为50.12％，与之相比，绿萝花的乙酸乙酯相的抑制率明显高于阿卡波糖。因此，进一步研究绿萝花乙酸乙酯萃取部分（EAF），在研究EAF相对酶的活性抑制作用发现，其对α-葡萄糖苷酶的抑制效果随着乙酸乙酯部分浓度的增加而增强，α-葡萄糖苷酶的抑制率对EAF样品浓度具有依赖性，且半数抑制浓度IC50为43.63μg/ml。在研究EAF对α-葡萄糖苷酶抑制作用的动力学实验中发现，绿萝花的EAF部分浓度的改变不改变酶促反应的最大反应速度（Vmax），只影响米氏常数（Km），确定其抑制类型为竞争性类型，并且得到米氏常数Km为0.1612μg/ml，EAF对酶的抑制常数（Ki）为21.49μg/ml。 最后，在对绿萝花提取物的各个部分对小鼠餐后糖耐量的研究中发现，在对小鼠进行蔗糖灌胃后，血糖浓度在30min后达到最高值，60min后下降，120min后血糖浓度达到平稳。蔗糖+EAF组、蔗糖+nBF组，蔗糖+WF组和蔗糖+全提物组，在分别灌胃后30nun后，测得的血糖数据通过T值检验，与蔗糖组相比，P值分别为：pa=0.004<0.01；pb=0.001<0.01；pc=0.103>0.05，pd=0.01<0.05，除了蔗糖+WF组外，其它组与蔗糖组比较，都具有显著性的差异，对降低餐后血糖浓度，血糖的上升有一定的抑制作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1糖尿病现状

1.2糖尿病治疗

1.2.1西医对糖尿病治疗

1.2.2中医对糖尿病的治疗

1.3 α-葡萄糖苷酶抑制剂与糖尿病

1.3.1α-葡萄糖苷酶

1.3.2α-葡萄糖苷酶抑制剂

1.3.3α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究进展

1.4藏药概况

1.5本课题的研究的内容和意义

1.5.1本课题研究的内容

1.5.2本课题研究的意义

第二章 微波提取西藏绿萝花实验条件的研究

2.1前言

2.1.1微波辅助萃取机理

2.1.2微波萃取的特点

2.1.3微波萃取的影响因素

2.1.4对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

2.2实验部分

2.2.1材料与仪器

2.2.2微波辅助提取

2.2.3直接加热提取

2.2.4酶活性的测定

2.3结果与讨论

2.3.1微波功率对提取效果的影响

2.3.2乙醇与绿萝花质量比对提取效果的影响

2.3.3提取时间对提取效果的影响

2.3.4微波辅助提取与直接加热提取的比较

2.4本章小结

第三章 绿萝花提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性的动力学研究

3.1前言

3.1.1酶促反应的影响因素

3.1.2抑制作用的分类

3.2实验部分

3.2.1试剂与仪器

3.2.2绿萝花的提取

3.2.3 α-葡萄糖苷酶体外抑制活性实验

3.2.4α-葡萄糖苷酶抑制动力学实验

3.3结果与讨论

3.3.1不同极性的萃取部分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

3.3.2 EAF对α-葡萄糖苷酶的抑制作用类型

3.4本章小结

第四章 绿萝花提取物体内活性实验的研究

4.1前言

4.2实验部分

4.2.1试剂与仪器

4.2.2血糖测定原理

4.2.3餐后血糖实验

4.3结果和讨论

4.4本章小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的论文

致谢