溶藻弧菌质粒及耐药性和致病性的研究

摘要

本研究主要从海南岛部分近岸海域和患病水产动物体内分离不同的溶藻弧菌菌株，研究该地区溶藻弧菌的质粒、耐药性和致病性，并探讨其质粒与耐药性和致病性的关系，研究结果如下： 1.以海南岛近岸海域内的生活养殖混合区、养殖区和患病水产动物体内外(病灶及各脏器部位)为菌种分离对象，采用TCBS培养基进行溶藻弧菌菌株分离，通过溶藻弧菌快速鉴定试剂盒和传统的生化鉴定相结合的方法，从约115株细菌中快速、准确分离到60株不同来源的溶藻弧菌分离株，其中，生活养殖混合区23株，养殖区29株，患病水产动物8株； 2.采用碱裂解法提取溶藻弧菌各菌株的质粒，构建其质粒图谱。在所研究的60株溶藻弧菌中，12株菌株携带有质粒，质粒携带率为20％；这些菌株所携带的质粒包括11种不同的类型，其大小从1 kb到60 kb之间，每个菌株携带1～3个质粒。根据所携带质粒的大小与数量的不同，这60株菌株可分为7种质粒类型。在上述不同来源的菌株中，生活养殖混合区的携带质粒菌株的数量最多，共9株；其次是患病水产动物体内外的菌株，共2株；最少的是养殖区菌株，只有1株。 3.采用美国临床标准委员会(NCCLS)推荐的K-B琼脂法和杭州微生物试剂有限公司生产的40种成套药敏纸片进行药敏实验。结果表明，溶藻弧菌分离株的耐药性严重，每株菌株都有程度不同的“耐药”现象。对50％以上的菌株都显示“耐药”的抗生素有23种，占检测药物总数的57.5％；对80％以上的菌株都显示“耐药”的抗生素有17种，占总药物种类的42.5％。所有菌株都有不同程度的多重耐药现象，多重耐药率达100％。方差分析结果表明，生活养殖混合区分离株和养殖区分离株之间的耐药性差异显著(P<0.05)，生活养殖混合区分离株和患病水产动物体内外分离株之间的耐药性差异也达到了显著水平(P<0.05)。对所分离的各菌株的耐药性的研究结果表明，这些菌株对美洛西林等16种抗生素的耐药谱完全相同，说明这些药物的耐药基因很可能存在于这些菌株的质粒DNA中。 4.将12株携带不同质粒的菌株和随机抽取的10株不携带质粒的菌株分别感染野生鲻鱼(Mugil cephalus Linnseus)，从中筛选溶藻弧菌的毒株。携带质粒的菌株HN06016(质粒Ⅰ型)、HN06002(质粒Ⅱ型)和 HN06003(质粒Ⅳ型)和不携带质粒的菌株(质粒Ⅶ型)：HN06030和HN05005都对实验动物表现出较强的毒力，它们的LD<,50>分别为：HN06016：1.29×10<'5> CFU/g；HN06002：1.26×10<'5> CFU/g；HN06003：1.99×10<'4> CFU/g；HN06030：1.58×10<'6> CFU/g；HN05005：1.26×10<'5>CFU/g。溶藻弧菌对鲻鱼的致病性与其质粒无直接的联系。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1.弧菌病原的危害和种类

2.病原弧菌的病致病因子

3.弧菌质粒与耐药性和毒力的相关研究

4.溶藻弧菌的研究进展

4.1溶藻孤菌的分类地位及生物生理学特性

4.2溶藻弧菌致病因子

4.3溶藻弧菌分型与毒性的研究

第二章实验研究

前言

第一节溶藻弧菌的分离和鉴定

1材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第二节溶藻弧菌质粒的提取

1材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第三节溶藻弧菌药敏试验

1材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第四节溶藻弧菌质粒与其致病性关系的研究

1材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

第五节研究结论

在学期间的研究成果

致谢

参考文献

附录