利用多种途径进行海南龙血树种质创新

摘要

本试验以龙血树幼嫩茎段为材料，通过对龙血树幼嫩茎段两步培养法再生的研究，建立了龙血树幼嫩茎段离体再生体系，证明了愈伤组织的发生和激素种类与浓度的关系；并在此基础上研究了愈伤组织再生对不同人工诱变方法(60Co辐射、EMS、秋水仙素)的反应、被处理愈伤组织再生能力和再生植株性状多样性、以及再生植株不同生理角度(外观性状、细胞学)的变异性，得到了2株变异株系。并从龙血树商业种植苗圃里选择出11种变异类型。 (1)首次对海南龙血树进行了种质创新途径的研究，田间自然变异的选择是目前最为有效的途径，组织培养分别培结合EMS、60Co辐射和秋水仙的诱变途径也是有效果的。田间实生群体自然变异可高达20％，已发现有11中种变异类型，其中LXZ09类型的变异率高达8％。EMS诱变途径中，浓度为2.0％的获得最高的微核率(15.6‰)，EMS浓度为2.0％处理时间为4h的组合使材料达到半致死；细胞学的观察看到了单微核、双微核、三微核、染色体桥、滞留染色体和合胞体等染色体畸变现象，再生苗中发现了1棵变异株。60Co辐射的诱变途径中，20Gy的剂量使不定芽半致死，再生苗中发现了1棵变异株。秋水仙素诱导多倍体途径中秋水仙素浓度0.5％，处理时间5d的处理组合能获得较高的多倍率，多倍率为25％。 (2)首次获得了海南龙血树新种质13份，并较为系统地对11份自然变异的种质进行了植物学性状观察，其中6份材料具有成为龙血树新品种的潜力。这11份资源中，LXS01、LXS02、LXS03、LXS04、LXS06、LXS07这几份材料具有成为龙血树新品种的潜力。 (3)首次鉴定了海南龙血树的染色体数目，构建了海南龙血树根尖体细胞染色体制片技术。其技术要点是于上午9时～10时采集根尖，用饱和的对二氯苯预处理6h，固定4～18h，置于1mol/L稀盐酸在60℃恒温水浴酸化6min，置载玻片切片后用改良石炭酸品红染色30min，敲片后显微观察。鉴定了海南龙血树染色体数目(2n=42)。 (4)初步构建了基于组织培养的海南龙血树诱变复合技术体系。再生体系技术要点是愈伤组织的诱导培养基为MS+6-BA6.0mg/L+NAA0.5mg/L，诱导率可达62％;增殖培养基为MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L，经4周培养，愈伤组织增殖率可达9.6；分化培养基为MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.1mg/L；生根培养基是MS+NAA0.3mg/L+AC1g/L，生根率为100％。再生体系结合EMS复合技术体系的要点是浓度为2.0％的EMS处理生长旺盛的愈伤组织时间为4h，后进行分化和生根培养。再生体系结合60Co辐射复合技术体系的要点是20Gy的剂量辐射生长旺盛的愈伤组织，后进行分化和生根培养。再生体系结合秋水仙素复合技术体系的要点是浓度为0.5％的秋水仙素处理生长旺盛的愈伤组织时间为5d，后进行分化和生根培养。

目录

文摘

英文文摘

声明

1引 言

1.1诱变育种的发展过程及现状

1.1.1自发突变给人工诱变育种引发的思路

1.1.2人工大田诱变育种的产生和发展

1.1.3人工诱变育种的几种常用方法

1.1.4花卉辐射诱变育种展望

1.2组织培养技术及其在花卉育种中的概况

1.2.1组织培养技术概况

1.2.2组培诱变育种在生产中的应用

1.2.3外植体再生的影响因素

1.3诱变与组织培养结合研究进展

1.3.1诱变育种、组织培养和生物技术三者的结合

1.4龙血树再生体系的研究进展

1.4.1龙血树再生体系发生途径的研究进展

1.5立题目的及研究意义

2实验材料

2.1实验材料

2.2实验用具和药品

2.2.1化学试剂

2.2.2仪器用具

2.2.3试剂的配置

3材料和方法

3.1龙血树田间变异的观察和选择

3.2基于组织培养的复合技术诱导龙血树变异

3.2.1基本技术的研究和建立

3.2.2 EMS诱变

3.2.3 60Co辐射诱变

3.2.4秋水仙素诱变方法

4结果与分析

4.1龙血树田间变异的观察和选择

4.1.1龙血树田间变异的观察

4.1.2变异材料的植物学性状的观察

4.2基于组织培养的复合技术诱导龙血树变异

4.2.1基本技术的研究和建立

4.2.2 EMS诱变方法

4.2.3 60Co辐射诱变实验

4.2.4秋水仙素诱导龙血树愈伤组织细胞染色体加倍

5讨论

5.1关于龙血树种质创新途径

5.2关于龙血树田间变异的选择

5.3关于龙血树诱变方法

5.3.1关于EMS诱导龙血树变异

5.3.2关于60Co辐射诱导龙血树变异

5.3.3关于秋水仙素诱导龙血树多倍体

6.结论

参考文献

附录

致谢