三氧化二砷对A375人恶性黑素瘤细胞株黑素生成和细胞凋亡的研究

摘要

目的:研究不同浓度的三氧化二砷(As2O3)对A375人恶性黑素瘤细胞株细胞活力、酪氨酸酶活性及黑素生成的影响,并探讨其对A375细胞株的促凋亡作用.方法利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,465nm比色法测定黑素含量;并用倒置显微镜、电子显微镜观察A375细胞株形态变化和凋亡特征;流式细胞仪分析DNA含量、检测亚二倍体凋亡峰及细胞周期.结果1. As<,2>O<,3>浓度<0.01μmol/L时,随As<,2>O<,3>浓度的增加促进黑素瘤细胞的增殖,等于0.01μmol/L时作用最强;0.1~1.0μmol/L表现为抑制作用;大于1.0μmol/L出现细胞毒性作用;大于2.0μmol/L则出现明显细胞毒性作用,与对照组比较有差异(P<0.05).2.As<,2>O<,3><0.01 μmol/L时,酪氨酸酶活性和黑素含量均随As2O3浓度的增加而升高,0.01 μmol/L时峰值最高,与对照组比较均有差异(P<0.05);>0.01μmol/L时,则随药物浓度的增加,酪氨酸酶活性和黑素含量均逐渐降低,在16.0μmol/L时峰值最低,与对照组比较酪氨酸酶活性有差异(P<0.05),而黑素含量则缺乏显著性差异(P>0.05).3.1.0~4.0μmol/L组作用72h后,A375细胞出现较典型的凋亡形态特征(凋亡小体);2.0μmol/L组和4.0μmol/L组作用72h后流式细胞仪检测到亚二倍体凋亡峰,同时As<,2>O<,3> 8.0μmnol/L组凋亡高峰出现在24小时时间段,4.0μmol/L组凋亡高峰出现在48小时时间段,2.0μmol/L组凋亡高峰出现在72小时时间段,1.0μmol/L组凋亡高峰出现在96小时时间段.4.As<,2>O<,3>处理后,细胞阻滞在S期和G2/M期,特别是S期细胞增多明显,最高达到54.85﹪.结论1.经As<,2>O<,3>处理后A375人恶性黑素瘤细胞株的细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的生成与As<,2>O<,3>的浓度呈双相性变化.2.高浓度As<,2>O<,3>能有效抑制A375人恶性黑素瘤细胞株的生长并促进其凋亡,同时出现S期阻滞.

目录

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

附图

参考文献

综述：三氧化二砷作用机制的研究进展

参考文献

缩略语

作者简介

致谢