人羊膜细胞具有分化成软骨及成骨细胞的潜能

摘要

目的：通过组织工程技术治疗骨及软骨缺损是目前医学领域研究的热点，种子细胞是构建组织工程化人工骨和软骨的关键要件。人羊膜细胞具有干细胞特性，具有其它种子细胞不可替代的优越性。本课题通过体外定向诱导人羊膜间充质细胞(hAMCs)及人羊膜上皮细胞(hAECs)向软骨细胞、成骨细胞分化，探讨hAECs和hAMCs作为骨及软骨组织工程种子细胞的可行性。 方法：①采用机械法和酶法从人羊膜组织中分离hAECs和hAMCs，经原代培养后用流式细胞仪(FCM)分别检测其表面分子CD44、CD29和CD71的表达情况，并用免疫细胞化学方法进行鉴定。②在体外培养条件下，用TGF-β1、地塞米松(DEX)、维生素C(VitC)和ITS诱导传代后的hAMCs向软骨细胞分化，分别于第7、14、21、28天采用细胞化学和免疫细胞化学法检测酸性蛋白聚糖和特异性Ⅱ型胶原的表达情况以鉴定软骨细胞。③分别加入DEX、VitC和β-GP定向诱导传代后的hAECs和hAMCs向成骨细胞分化，用Ca-Co法检测成骨细胞特异性的碱性磷酸酶的表达，用茜素红S检测钙盐沉积。 结果：①采用胰蛋白酶消化法从羊膜中分离hAECs，经胰蛋白酶消化后的组织用胶原酶消化则可获得hAMCs，二者均表达间充质干细胞(MSCs)表面标志CD44、CD29和CD71。②诱导14d以后，hAMCs由长梭型逐渐变为椭圆形、多角形，用免疫组化方法可检测到Ⅱ型胶原蛋白表达，甲苯胺蓝染色可见软骨细胞特异性细胞外基质蛋白聚糖，软骨细胞数量随诱导时间的延长而逐渐增多。③诱导21天的hAECs和hAMCs均可观察到胞浆内有碱性磷酸酶表达，且可见钙盐沉积现象。 结论：①hAECs和hAMCs具有MSCs的特性。②体外单层培养的hAMCs可定向诱导成软骨细胞或者说进入了软骨起源细胞系，说明人羊膜可作为软骨种子细胞来源。③hAECs和hAMCs在体外诱导条件下,具有成骨特性，这表明人羊膜可作为骨组织工程种子细胞来源。④TGF-β1、DEX、VitC以及ITS是体外诱导hAMCs向软骨细胞分化的有效诱导因子，而DEX、VitC、β-GP是hAECs和hAMCs体外成骨分化的有效诱导因子。

目录

论文说明：英文缩写词

摘要

前 言

材料和方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

致 谢

综 述 人羊膜上皮细胞的研究进展