HARV和微载体技术在胎儿BMSCs向软骨细胞转化中的应用

摘要

目的：利用体外培养的技术原理，在高截面纵横比容器(highaspectratiovessel，HARV)中应用微载体技术和无血清完全培养基进行胎儿骨髓间充质干细胞(bonemesenchymalstemcells，BMSCs)向软骨细胞的诱导分化，以有效获得表型正常的软骨组织工程用功能细胞。方法：取引产胎儿骨髓悬液，经Percoll密度梯度离心，获取单个核细胞；以含10％胎牛血清低糖DMEM培养基培养，经12～14天后获得成纤维样单层贴壁的胎儿BMSCs；胰酶消化、传代，取第3代的细胞经流式细胞仪鉴定纯度后，以其为种子细胞，1×107个细胞与Cytodex-3微载体充分混匀后，放入HARV中，在无血清完全培养基作用下诱导培养，分别于培养的7、14天取材，RT-PCR技术检测细胞内Ⅱ型前胶原mRNA的表达水平；同时以培养瓶诱导培养作对照。结果：经Percoll密度梯度离心所获得的单个核细胞贴壁、扩增、传代后，流式细胞仪鉴定胎儿BMSCs的纯度达95％以上；培养瓶诱导培养组未检测出细胞内Ⅱ型前胶原mRNA的表达；高截面纵横比容器诱导组在培养7、14d检测出细胞内Ⅱ型前胶原mRNA的表达。结论：Percoll密度梯度离心联合细胞贴壁筛选的方法可获得高纯度的胎儿BMSCs；经高截面纵横比容器联合无血清完全培养基诱导培养后，胎儿BMSCs有向软骨细胞转化的能力。

目录

摘要

前言

1材料与方法

2结果

3讨论

结论

附图

参考文献

综述应用于组织工程中的生物反应器

摘要

1引言

2组织工工程对生物反应器的要求

3用于组织工程的生物反应器

4展望

附图

参考文献

致谢