人羊膜细胞具有向心肌样细胞分化的特性

摘要

目的：心肌成形术(CCM)为治疗因心肌细胞受损而导致的心脏功能衰退提供了理想的途径。人羊膜细胞可能成为CCM的细胞来源。然而，人羊膜细胞中的上皮细胞(hAECs)和间充质细胞(hAMCs)向心肌细胞的分化潜能及其体外诱导的影响因素均尚待进一步探讨。本研究试图通过体外诱导分化实验，以评价hAECs和hAMCs向心肌细胞分化的能力，为人羊膜细胞作为CCM的细胞来源提供实验依据。 方法：①采用胰蛋白酶一胶原酶分离法分离hAECs和hAMCs，用流式细胞仪(FCM)进行表型鉴定。②hAECs和hAMCs均用10μmol/L 5-氮杂胞苷(5-aza)诱导24h，随后hAECs用含抗坏血酸磷酸盐和5％胎牛血清的培养基继续培养；而hAMCs用含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和5％胎牛血清的培养基继续培养。③分别取诱导后第12d的hAECs和诱导后第8d的hAMCs，采用RT-PCR检测心肌特异性转录因子Nkx2.5和GATA-4 mRNA的表达。④取诱导后2周、4周的hAECs和hAMCs，用免疫荧光染色法检测肌细胞特异蛋白α-辅肌动蛋白和结蛋白的表达。 结果：①通过胰蛋白酶和胶原酶消化可分离较高丰度的人羊膜细胞，每份羊膜可获得5.01×10<'7>hAECs和6.30×10<'7>hAMCs；FCM分析显示hAECs几乎不表达CD44，而hAMCs中有26.6％表达CD44。②hAECs经5-aza和抗坏血酸诱导后，表达肌系细胞标志结蛋白和α-辅肌动蛋白，有心肌特异性转录因子Nkx2.5和GATA-4的mRNA的表达。③hAMCs经5-氮杂胞苷和bFGF诱导后，表达结蛋白、α-辅肌动蛋白、GATA-4和Nkx2.5。 结论：①胰蛋白酶—胶原酶分离法可获得高丰度的hAECs和hAMCs。②hAECs和hAMCs均具有向心肌样细胞分化的能力，可望成为CCM的候选细胞。

目录

摘要

前 言

材料和方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

致 谢

附录

综 述：羊膜上皮细胞向心肌细胞诱导分化的研究进展