人参皂苷Rg1对环磷酰胺诱导骨髓抑制小鼠骨髓功能的改善及机制研究

摘要

目的：研究人参皂苷Rgl对环磷酰胺(cyclophosphamide，CY)诱导的骨髓抑制小鼠骨髓功能的影响，以钙敏感受体(calcium-sensing receptor， CaSR)为靶点，探讨Rgl可能的作用机制。
　　 方法：腹腔注射CY150mg/kg/d，连续给药3d，制备小鼠骨髓抑制模型，实验分为空白组、模型组、单用人参皂苷Rgl高剂量组(high dose Rgl，RH组)、骨髓抑制人参皂苷Rgl低、高剂量治疗组(BM depression with low or highdose Rgl，MRL or MRH组)，Rgl按7.5和15 mg/kg/d腹腔注射给药，连续7d；取股骨计数骨髓(bone marrow， BM)细胞数；流式细胞仪检测不同细胞亚群百分率；股骨切片进行组织病理学检查，实时荧光定量PCR(Real Time PCR)测定CaSR和MAPK mRNA水平，免疫荧光染色分析CaSR蛋白的表达；ELISA法测定干细胞因子(stem cell factor， SCF)、基质细胞源性生长因子1(stromal cell derived factor1，SDF-1)和白介素-3(interleukin-3，IL-3)含量。
　　 结果：①与空白组比较，模型组BM细胞数明显减少；而RH组有增高趋势，但无统计学意义；与模型组相比，MRH组BM细胞数显著增高，且明显改善BM组织的形态学变化。②与正常组比较，模型组BM和外周血(peripheral blood，PB)的Lin-Sca-1+c-kit+细胞(LSK细胞)、Sca-1-CD44+CD166+细胞和CD133+flk-1+细胞及PB中淋系细胞的百分率都明显减少趋势，RH组仅在PB中表达Sca-1-CD44+CD166+细胞百分率增高：与模型组比较，MRH组BM和PB中三个细胞群及PB中淋系细胞(CD3+)的百分比都显著增高趋势；③与空白组比较，模型组PB中表达CD11b+细胞(粒单细胞)百分率有增高趋势；与模型组比较，MRH组PB中表达CD11b+细胞百分率有增高趋势。④与空白组比较，模型组BM细胞间液中SCF、SDF-1及PB血清中SCF、SDF-1、IL-3均显著降低(P<0.05)，RH组与C组比较无明显改变，但MRH组与M组比较，BM细胞间液和PB血清中SCF、SDF-1和IL-3都显著增高(P<0.01)。⑤M组中，骨髓的CaSR及MAPK mRNA水平和蛋白表达均显著增加，而给予Rgl后的MRH可降低其表达(P<0.05)。
　　 结论：①Rgl对正常机体的骨髓功能可产生一定影响，在不改变BM细胞总数的同时，可增加BM中CD133+flk-1+细胞比例、PB中Sca-1-CD44+CD166+细胞和粒单细胞比例，提示Rgl可能分别增加正常小鼠BM和PB中内皮祖细胞(endothelial progenitor cell，EPC)和间充质干(mesenchymal stemcell，MSC)细胞数量。②CY诱导的骨髓抑制，除造成BM细胞数降低外，BM和PB中LSK细胞、Sca-1-CD44+CD166+细胞和CD133+flk-1+细胞比例也降低，且PB中淋系细胞比例也降低，提示CY引起骨髓抑制时，BM的造血干细胞(haemopoietic stem cell，HSC)、MSC和EPC增殖、分化和动员可能产生明显障碍，其作用机制与上调BM细胞CaSR及MAPK mRNA水平和蛋白表达，下调BM细胞间液SCF、SDF-1含量，下调PB血清中SCF、SDF-1和IL-3水平有关(P<0.05或P<0.01)。③在CY导致的骨髓抑制状态下，Rgl可促进骨髓功能的恢复，增加骨髓细胞总数，提高LSK细胞、Sca-1-D44+CD166+细胞和CD133+flk-1+细胞的比例，改善BM组织的形态学变化，并可能动员骨髓干细胞至外周，使PB中LSK细胞和Sca-1-CD44+CD166+细胞比例升高，提高PB中淋、粒单细胞比例，提示Rgl可能通过促进HSC的增殖、分化和动员到外周。④Rgl恢复骨髓功能作用的机制涉及上调BM细胞CaSR及MAPK mRNA水平和蛋白表达，上调BM细胞间液和PB中SCF、SDF-1和IL-3含量。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英汉缩略词对照表

声明

前言

一、材料与方法

1. 材料与仪器

1.1 动物

1.2 药品与主要试剂

1.3 主要仪器设备

2. 方法

2.1 实验分组及给药

2.2 标本采集

2.3 骨髓(bone marrow，BM)细胞计数

2.4 股骨及其BM的组织形态学的观察

2.5 流式细胞仪检测

2.6 ElISA法检测PB血清及BM细胞间液中IL—3、SDF—1、SCF的含量

2.7 real—time PCR检测小鼠BM细胞中CaSR和MAPK mRNA水平

2.8 免疫荧光检测股骨及其BM中CaSR蛋白质的表达

3. 统计学处理

二、实验结果

1.Rg1对BM细胞数的影响

2.Rg1调节BM及PB细胞中LSK细胞、Sca-1-CD44+CD166+细胞和CD133+flk-1+细胞三个细胞群的比例变化趋势

2.1 LSK细胞百分率的变化

2.2 Sca-1-CD44+CD105+CD166+细胞百分率的变化趋势

2.3 CD133+flk-1+细胞百分率的变化趋势

2.4 Rg1对PB淋系细胞百分率的影响

2.5 Rg1对PB粒单细胞百分率的影响

3. Rg1对小鼠股骨骨髓组织形态学改变的影响

4. Rg1对骨髓细胞中CaSR及MAPK mRNA水平的影响

5. Rg1调节骨髓细胞CaSR的蛋白表达

6. BM细胞间液及PB血清中SCF、SDF—1及IL—3的含量

三、讨论

四、结论

参考文献

综述 钙敏感受体在组织中的表达及其作用、作用机制

在读期间论文发表、参加学术交流会议情况

致谢