一株踝节菌属真菌Talaromyces wortmannii LGT-4化学成分研究

摘要

为了充分发掘踝节菌属真菌Talaromyces wortmannii LGT-4次级代谢产物方面的潜力，本文展开了该真菌培养基条件的研究，并选择了大米培养基和玉米培养基作为发酵培养基，运用多种现代色谱分离手段（如柱色谱法，制备薄层色谱法，高效液相色谱）分离纯化了11个化合物，并借助1D NMR、2D NMR、ESI-MS、Mosher反应、单晶X-射线衍射、ECD谱等波谱分析手段对其进行了结构鉴定，得到了6个新化合物，5个已知化合物。对这些化合物的抗单胺氧化酶、抗乙酰胆碱酯酶和细胞毒性活性进行了评价。研究结果如下：
　　（1）运用HPLC分析方法，分析了PDB培养基、大米培养基等12种培养基发酵条件下T. wortmannii LGT-4次级代谢产物化学组成上的差异，证实了培养条件的确会对真菌的代谢过程产生影响。选择了大米培养基和玉米培养基这两种固体培养基作为发酵培养基进行后续T. wortmannii LGT-4次级代谢产物化学成分的研究。
　　（2）对T. wortmannii LGT-4大米培养基的发酵次级代谢产物进行分离纯化，获得3个化合物，经鉴定其中有2个为新化合物，分别命名为deacetylisowortmin A（1）和deacetylisowortmin B（2），1个为已知化合物，其名称为5-羟基-2-(2-羟基-6-甲氧基-4-甲基苯甲酰基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯（3）。
　　（3）对 T. wortmannii LGT-4玉米培养基上发酵次级代谢产物进行分离纯化，获得8个化合物，4个为新化合物：wortmannines A-D（4-7），4个为已知化合物：entonaemin A（8）、内消旋-1,4—双（4-甲氧苯基）-2,3-丁二醇（9）、m onomethylsulochrin（10）、(4S,4aS,5R,6aS,9aR)-5-（乙酰氧基）-1-（氨基亚甲基）-4,4a,5,6,6a,8,9,9a-八氢-11-羟基-4-（甲氧亚甲基）-4a,6a-二甲基-环戊二烯[5,6]萘酚[1,2-c]吡喃-2,7,10（1H）-三酮（11）。其中 wortmannines A-C（4-6）具有新型的骨架结构，化合物4是一种具有五元B环结构的降二碳wortmannin衍生物，化合物5是一种具有五元B环结构和一个内酰胺E环结构的wortmannin衍生物，化合物6一种具有五元B环结构和一个内酯E环结构的wortmannin衍生物，化合物7是一个4-甲基取代的雄甾二烯-17-酮。
　　（4）分别测定了以上11个化合物的抗单胺氧化酶活性、抗乙酰胆碱酯酶活性、和细胞毒性活性。结果表明：只有化合物8（entonaemin A）表现出了良好的抗HL60活性，其IC50值为15.0μM(处理24h)和12.4μM(处理48h)。

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第1章 绪论

1.1 踝节菌属真菌次级代谢产物研究概况

1.1.1 抗菌活性的次级代谢产物

1.1.2 杀虫活性的次级代谢产物

1.1.3 抗肿瘤活性的次级代谢产物

1.1.4 酶抑制活性的次级代谢产物

1.2 课题研究目的和意义

第2章 培养基的筛选

2.1 引言

2.2 材料与仪器

2.2.1 菌种材料

2.2.2 培养基

2.2.3 实验试剂及仪器

2.3 实验方法

2.3.1 菌株LGT-4在不同培养基条件下发酵次级代谢产物提取物的制备

2.3.2 HPLC分析条件的确定及具体分析方法

2.4 实验结果与讨论

第3章 T. wortmannii LGT-4次级代谢产物研究

3.1 引言

3.2 材料与仪器

3.2.1 菌种材料

3.2.2 培养基

3.2.3 实验材料与试剂

3.2.4 实验仪器

3.3 实验方法

3.3.1 菌株LGT-4大米培养基发酵产物的研究

3.3.2 菌株LGT-4玉米培养基发酵产物的研究

3.3.3 化合物6的(R)-和(S)-MTPA酯的制备

3.3.4 ECD谱的计算方法

3.3.5 化合物抗单胺氧化酶活性的测定[56,57]

3.3.6 化合物抗乙酰胆碱酯酶活性的测定[58]

3.3.7 化合物的体外细胞毒性活性的测定[60, 61]

3.4 实验结果与分析

3.4.1 化合物的结构鉴定

3.4.2 化合物的生物活性

结论

参考文献

致谢

附录A（攻读硕士学位期间所发表的论文及成果）

附录B（化合物1、2和4~7图谱）