虎纹捕鸟蛛粗毒对人结肠癌SW480细胞体外增殖的影响

摘要

目的:研究虎纹捕鸟蛛粗毒对体外培养的人结肠癌SW480细胞株增殖的影响,初步探讨虎纹捕鸟蛛粗毒抗结肠癌细胞的活性,为结肠癌药物的研发提供新的思路,为进一步分离纯化虎纹捕鸟蛛粗毒中抗肿瘤成分奠定基础。
　　 方法:以体外培养的人结肠癌SW480细胞株为实验模型,以不同浓度的虎纹捕鸟蛛粗毒溶液对肿瘤细胞进行体外干预实验,通过MTT药物敏感实验检测其抑制率及计算IC50:通过光学显微镜直接观察以及Hoechst33342染色后观察该毒素对细胞形态变化的影响:经AnnexinV-FITC/PI双染,利用流式细胞仪观察干预前后细胞发生的凋亡及坏死;利用琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA的变化;分光光度法测定细胞中Caspase-3的相对活化程度。
　　 结果:MTT实验结果表明,虎纹捕鸟蛛粗毒干预人结肠癌SW480细胞48小时后,1mg/ml虎纹捕鸟蛛粗毒对人结肠癌SW480细胞表现为促进作用,5～100mg/ml虎纹捕鸟蛛粗毒对人结肠癌SW480细胞表现为抑制作用,且呈现一定的剂量效应关系,其48小时的半抑制浓度(IC50)为43.68mg/ml;光学显微镜观察虎纹捕鸟蛛粗毒干预后的SW480细胞株细胞数量明显减少,细胞形态各异,并出现细胞碎片:Hoechst33342及AnnexinV-FITC/PI染色结果均表明,干预后的细胞既有凋亡改变,也有坏死改变,且随着粗毒浓度及干预时间的增加,坏死细胞比例增加;琼脂糖凝胶电泳结果显示,虎纹捕鸟蛛粗毒干预后的细胞DNA发生降解;Caspase-3活化程度检测表明,虎纹捕鸟蛛粗毒干预后的细胞,细胞质中Caspase-3相对活化程度与阴性对照相比并无明显升高。
　　 结论:1.虎纹捕鸟蛛粗毒对体外培养的人结肠癌SW480细胞在低浓度时可促进细胞的增殖,高浓度时抑制细胞增殖,但以抑制增殖的作用为主。2.高浓度的虎纹捕鸟蛛粗毒干预后的人结肠癌SW480细胞既有细胞凋亡的发生,亦有细胞坏死的发生。3.高浓度的虎纹捕鸟蛛粗毒可使人结肠癌SW480细胞DNA发生降解,但并没有明显提高细胞质中Caspase-3相对活化程度。本研究提示,虎纹捕鸟蛛粗毒对体外培养的人结肠癌SW480细胞增殖的抑制机制可能与其他毒素稍有不同,并非通过与Caspase-3活化有关的途径进行。