杜仲叶绿原酸提取物及其主要组分联全西红花苷调脂作用机制研究

摘要

目的:观察杜仲叶绿原酸提取物（CAEF）对大鼠胰脂酶活性的影响，以及CAEF及其主要组分（绿原酸、槲皮素、京尼平苷）与西红花苷联合配比物（C+C+G+Q）对HepG2细胞胆固醇代谢环节中相关基因与蛋白表达的影响，探讨其调脂与减肥作用机制，以求为临床血脂异常、肥胖症和动脉粥样硬化的防治提供新的候选药物。
　　 方法:1.采用高脂乳剂及相应药物（CAEF20％，CAEF42％和奥利司他）灌胃SD大鼠3d，收集3d内的粪便，测定其中总脂、总胆固醇(TC)与胆汁酸含量，以评价药物对肠道脂肪吸收以及对胰脂酶活性抑制的影响;2.培养人肝癌HepG2细胞，通过MTT法绘制细胞生长曲线，以确定适宜的培养细胞数量及时间，并取对数期细胞进行实验，确定此条件下CAEF的有效浓度范围;3.分别用相应药物对培养的HepG2细胞干预48h后，油红O染色观察药物对细胞内甘油三酯(TG)积聚的影响;4.分别以相应药物干预培养的HepG2细胞24、48h后，测定细胞外液TC、TG的含量，观察药物对细胞TC、TG外排的影响;5.RT-PCR测定ABCA1、SREBP2、CYP7A1、LXRα(NR1H3)、AMPKα2(PRKAA2)、HMGCR mRNA的表达量，观察药物对各基因表达的影响;6.免疫细胞化学和Western Blot观察药物对细胞HMGCR蛋白表达的影响。
　　 结果:1.CAEF(42％)组大鼠粪便中的总脂含量既高于高脂模型组又高于奥利司他组(P＜0.05)，粪便中胆固醇与胆汁酸的含量也明显高于高脂模型组(P＜0.05)，CAEF(42％)表现出良好的抑制肠道脂肪吸收和增加胆固醇与胆汁酸排泄的作用;2.MTT比色法确定2×104/mL为实验细胞浓度，25mg/L CAEF为实验药物浓度;3.油红O染色观察发现，CAEF与C+C+G+Q作用48h后，细胞内的中性脂滴明显减少，同时CAEF与C+C+G+Q的作用均强于辛伐他汀与相应单组分，且C+C+G+Q强于CAEF;4.CAEF与C+C+G+Q分别作用24h、48h后，与对照组相比显著增加细胞TC、TG的外排(P＜0.05)，且其外排作用均明显强于辛伐他汀与各单组分(P＜0.05);5.RT-PCR研究发现，CAEF和C+C+G+Q能显著提高ABCA1、CYP7A1、AMPK2α mRNA表达(P＜0.05)，并明显降低SREBP2、HMGCR mRNA的表达(P＜0.05)，且对ABCA1与AMPKα2 mRNA表达的增强作用顺序为:C+C+G+Q＞CAEF＞辛伐他汀(P＜0.05)，另外，C+C+G+Q还能下调LXRα mRNA的表达(P＜0.05);6.免疫细胞化学法与Western Blot显示CAEF与C+C+G+Q均能抑制HepG2细胞中HMGCR蛋白的表达，同时Western Blot也证明C+C+G+Q的抑制作用强于CAEF(P＜0.05)。
　　 结论:1.CAEF对急性脂质负荷大鼠和人肝癌HepG2细胞模型均有较强的调脂作用，能够抑制大鼠肠道对外源性食物的脂质吸收，增加胆固醇、胆汁酸的排泄，抑制HepG2细胞内中性脂肪的积聚，增加HepG2细胞内TC和TG外排;2.上述作用机制与CAEF抑制胰脂酶活性，调节细胞内的胆固醇代谢途径的相关基因:上调ABCA1、CYP7A1、AMPKα2，下调SREBP2、HMGCR mRNA的表达，以及抑制细胞内HMGCR蛋白的表达有关;3.研究CAEF的调脂活性成分发现，CAEF的主要成分与西红花苷联合(C+C+G+Q)也能够上调ABCA1、CYP7A1、AMPKα2并下调SREBP2、HMGCRmRNA的表达，同时C+C+G+Q还能抑制LXRα mRNA的表达，抑制HMGCR蛋白的表达，从而参与细胞内胆固醇代谢的调控，改善脂质水平，且各项指标显示，C+C+G+Q的调脂作用优于CAEF。

目录

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主要英文缩略词表

摘要

前言

第一部分 杜仲叶绿原酸提取物调脂与减肥作用机制初探

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 杜仲叶绿原酸提取物对HepG2细胞胆固醇代谢途径的影响

1 材料

2 方法

3 实验结果

4 讨论

第三部分 绿原酸、槲皮素、京尼平苷、西红花苷联合配比物对HepG2细胞胆固醇代谢途径的影响

1 材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

结论

参考文献

综述

致谢

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