CIK逆转人肺腺癌细胞A549/DDP的顺铂耐药及其与细胞周期和凋亡的相关性研究

摘要

目的:探讨无毒剂量的细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine Induced Killer Cell, CIK)在体外对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞的顺铂耐药逆转作用及其与细胞周期和凋亡的相关性。
　　方法:1、采用MTT法检测CIK对A549/DDP细胞的杀伤活性,计算CIK对A549/DDP细胞的IC10作为无毒剂量以进行逆转耐药实验。2、MTT法检测顺铂对A549细胞及A549/DDP细胞的杀伤活性,计算IC50及A549/DDP细胞对顺铂耐药倍数RI。3、MTT法检测无毒剂量CIK联合顺铂对A549/DDP细胞杀伤活性,计算IC50及CIK逆转A549/DDP细胞的逆转倍数RF。4、采用流式细胞仪检测A549/DDP以及A549/DDP分别被顺铂、无毒剂量CIK联合顺铂干预后的细胞周期分布及凋亡情况。
　　结果:1、MTT法检测CIK对A549/DDP细胞的杀伤活性,计算IC10值效靶比为(15.244±1.429):1,≈15:1作为无毒剂量进行下一步逆转耐药实验。2、MTT法检测顺铂对A549细胞、A549/DDP细胞的杀伤活性,计算IC50值分别为(5.986±1.325)μg/ml、(31.170±2.487)μg/ml(差异有统计学意义,P<0.05)。通过公式计算A549/DDP细胞对顺铂的耐药倍数RI=5.207。3、无毒剂量CIK先作用A549/DDP细胞,再加入顺铂后的IC50值为:(11.230±1.865)μg/ml。计算得出无毒剂量CIK逆转A549/DDP细胞的逆转倍数RF=2.78。4、无毒剂量CIK先作用A549/DDP细胞,再加入顺铂后流式细胞仪检测显示A549/DDP细胞细胞周期被阻滞在G1期,细胞凋亡率明显增加。
　　结论:1、 CIK细胞在体外对A549/DDP细胞具有杀伤作用;2、顺铂在体外对A549/DDP细胞杀伤作用弱于A549细胞,提示A549/DDP细胞对顺铂存在耐药性;3、无毒剂量CIK在体外能够逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药,增强顺铂的药效;4、无毒剂量CIK在体外增强顺铂的药效可能是部分通过细胞周期、凋亡途径逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药。

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前言

1 材料与方法

1.1 靶细胞及效应细胞：

1.2 主要实验试剂

2.1 细胞的培养

2.2 细胞形态学观察

2.3 MTT法检测CIK对A549/DDP细胞的杀伤活性，计算IC10值，作为无毒剂量。

2.4 MTT法检测顺铂对A549细胞及A549/DDP细胞的杀伤活性，计算IC50值及耐药倍数RI。

2.5 MTT法检测无毒剂量CIK分别联合顺铂对A549/DDP细胞杀伤活性，计算IC50及

4 结果

4.1细胞形态观察

4.2 MTT法检测CIK对A549/DDP细胞的杀伤活性，计算IC10值。MTT法分别检测顺铂对A549细胞及A549/DDP细胞的杀伤活性，计算耐药倍数

4.3 流式细胞仪测定细胞周期

4.4流式细胞仪检测细胞凋亡率

5 讨论

6 结论

参考文献

综述

参考文献

致谢

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