胃癌中caveolin-1、Dnmt1蛋白和Dnmt1 mRNA的表达及caveolin-1基因CpG岛甲基化状态检测

摘要

目的：研究正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中caveolin-1、Dnmt1蛋白的表达及其二者表达的关系，并进一步检测了Dnmt1 mRNA表达情况及caveolin-1基因启动子区域5’CpG岛甲基化状况，探讨caveolin-1、Dnmt1基因与胃癌的发生发展及临床病理特征的关系。 方法：采用免疫组织化学技术SP法检测了20例正常胃黏膜、40例不典型增生胃黏膜和70例胃癌组织中caveolin-1、Dnmt1白的表达；并用原位杂交技术检测了20例正常胃黏膜、40例不典型增生胃黏膜及60例胃癌组织中Dnmt1基因mRNA的表达情况；应用MSP技术检测7例正常胃黏膜和37例胃癌组织中caveolin-1基因启动子区5’CpG岛甲基化状况，并同时运用免疫组化、原位杂交技术检测了caveolin-1蛋白、Dnmt1蛋白及Dnmt1 mRNA的表达状况。 结果: 1.正常胃黏膜腺上皮Dnmt1蛋白阳性表达率为0％(除增生的小凹上皮、淋巴细胞可染色阳性)，而70例胃癌组织中，Dnmt1蛋白阳性表达率为70％(49/70)。Dnmt1蛋白阳性表达率在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌各组间呈递增趋势，阳性表达率分别为0％(0/20)、35.0％(14/40)及70.0％(49/70)，x2检验显示组间差异性有统计学意义(x2=34.710，P<0.001)。Dnmt1蛋白在高、中、低分化腺癌三组内的阳性表达率分别为60.0％(12/20)、82.4％(14/17)及67.9％(23/33)，x2检验显示组间差异性无统计学意义(x2=2.189，P>0.05)。caveolin-1蛋白在正常胃粘膜及不典型增生胃黏膜腺上皮细胞浆中为阳性表达，而在胃癌细胞浆中基本为阴性表达，其蛋白阳性表达率在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌各组间呈递减趋势，阳性表达率分别为90.0％(18/20)、82.5％(33/40)及28.6％(20/70)，x2检验显示组间差异性有统计学意义(x2=41.806，P<0.001)。caveolin-1蛋白在高、中、低分化腺癌三组内的阳性表达率分别为50.0％(10/20)、41.2％(7/17)及18.2％(6/33)，x2检验显示组间差异性有统计学意义(x2=6.419，P<0.05)。 2.经x2检验，在胃癌组织中Dnmt1蛋白阳性表达率与性别、年龄、溃疡的大小、有无脉管转移和浸润深度等临床病理特征无关(P>0.05)，而与有无淋巴结转移有关(P＜0.05)。caveolin-1蛋白阳性表达率与性别、年龄无关(P>0.05)，而与有无淋巴结转移、浸润深度、有无脉管转移等临床病理特征有关(p＜0.05)。 3.Spearman等级相关分析显示Dnmt1蛋白与caveolin-1蛋白表达呈负相关(rs=-0.929，p＜0.05)。 4.Dnmt1 mRNA在正常胃黏膜腺上皮中基本呈阴性表达(除部分增生的小凹上皮)，在不典型增生胃黏膜、胃癌细胞胞浆中表达信号为阳性，其阳性表达率在三组间分别为0％(0/20)、25.0％(10/40)及63.3％(38/60)，呈递增趋势，x2检验组间差异有统计学意义(x2=30.694，P<0.001)；Dnmt1 mRNA阳性表达率在胃高、中、低分化腺癌三组间分别为50.0％(8/16)、58.8％(10/17)、74.0％(20/27)，x2检验显示组间差异无统计学意义(x2=2.715，P>0.05)。 5.Spearman等级相关分析显示Dnmt1 mRNA和蛋白表达呈正相关(rs=1.000，P<0.01)。 6.胃癌标本中，caveolin-1基因启动子CpG岛区域甲基化发生率为73.3％(22/30)，其中43.3％(13例)癌组织表现为完全甲基化；30.0％(9例)癌组织表现为部分甲基化。在7例正常胃黏膜中，caveolin-1蛋白表达均位于细胞浆内，Dnmt1蛋白、mRNA基本不表达(除部分增生的小凹上皮；Dnmt1蛋白也可在淋巴细胞中表达)。30例实验成功胃癌组织中，caveolin-1蛋白阳性表达率仅为30.0％(9/30)，Dnmt1蛋白阳性表达率为63.3％(19/30)，Dnmt1基因mRNA阳性表达率为53.3％(16/30)。 7.经Fisher精确概率法检验，caveolin-1基因启动子CpG岛区域甲基化发生率与性别、肿物大小、有无脉管侵犯、有无淋巴结转移和浸润深度等临床病理特征无关(p＞0.05)，而与年龄有关(P＜0.05)。 结论: 1.Dnmt1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率明显高于不典型增生及正常胃黏膜，Dnmt1的高表达可在一定程度上反映胃癌的侵袭能力；而caveolin-1的表达趋势与其恰恰相反。联合检测Dnmt1及caveolin-1蛋白在胃癌中的表达，有助于预估胃癌的浸润转移情况，可作为评价胃癌生物学行为的标志物。 2.胃癌组织中Dnmt1 mRNA表达具有与蛋白表达相同的增高趋势，Dnmt1的高表达在一定程度上反映疾病的恶性转化过程及胃癌的侵袭能力。 3.胃癌中caveolin-1表达的抑制与Dnmtl的高表达及该基因外显子1启动子区域CpG岛甲基化有关。

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

前言

第一部分Dnmtl及caveolin-1蛋白在胃癌组织中的表达及意义

材料与方法

结果

讨论

第二部分Dnmtl mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达

材料与方法

结果

讨论

第三部分胃癌组织中caveolin-1基因CpG岛甲基化与Dnmt1蛋白、mRNA表达的关系

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图

今后研究的展望

综述：CpG岛甲基化表型与胃癌

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致谢