Typl-HGF基因治疗TNBS诱发大鼠溃疡性结肠炎的实验研究

摘要

目的：评价携带肝细胞生长因子基因的减毒沙门氏菌(Typl-HGF)对TNBS诱发大鼠溃疡性结肠炎模型的治疗效果。 方法：1.分别用l×109cfu的减毒沙门氏菌(Ty)，携带绿色荧光蛋白的减毒沙门氏菌(Typl-GFP)、携带肝细胞生长因子基因的减毒沙门氏菌(Typl-HGF)、10％NaHCO3 0.3ml第0、14、28天灌胃免疫小鼠，末次免疫后7d，分别采集各组动物全血并抗凝，用流式检测抗凝血中CD4+、CD8+、IgM、IgG1、IgA，用EIASA检测血清IgM、IgG1、IgA免疫球蛋白，MTT法检测脾脏B、T淋巴细胞的增殖能力。 2.40只wistar大鼠经TNBS灌肠诱发溃疡性结肠炎模型，并随机分为4组：Ty治疗组、Typl-GFP观察组、Typl-HGF治疗组、模型对照组，每组10只；另设生理盐水灌肠的正常对照组10只。造模后第3d各组灌胃进行治疗，依次给予1×109cfu的Ty、Typl-HGF、Typl-GFP菌液，每只0.5ml，隔日一次，模型和正常对照组给予同体积的100g/L NaHCO3。3次和6次灌胃后1 W，分别观察各组大鼠的一般情况、结肠大体观及评分、结肠组织学变化及评分和目的基因表达，用流式细胞仪检测各组外周血CD4+、CD8+、IgM、IgGl、IgA。 结果：1.小鼠末次免疫后7d，Typl-HGF实验组CD4+、CD8、、CD4+/CD8+比值降低(p<0.01、p<0.05、p<0.01)。IgM、IgA无统计学意义，IgG1显著升高p<0.01。 2.3、6次灌胃模型组与正常组相比CD4+T、细胞无明显变化，但CD8+T细胞下降明显(P<0.01)；3次治疗组CD4+T低于模型组P<0.05，3、6次灌胃模型组CD4+/CD8+T比值较正常组升高(P<0.05)；6次灌胃治疗组CD4+、CD8+均明显低于模型组、对照组(P<0.01，P<0.01，P<0.05，P<0.05)，CD4+/CD8+T比值较模型、对照组下降(P<0.05)。3、6次灌胃模型组与正常组相比IgM、IgG1、IgA明显增加；3、6次对照组与同期模型相比IgM明显增加(P<0.01)，而6次治疗组与模型组相比IgM、IgG1明显降低(P<0.05)。 3.Typl-HGF治疗组3次灌胃后体重略有增加，较模型对照组平均增加5.3l±1.13g，但差异无统计学意义(P>0.05)，结肠炎常见症状如粘液脓血便、粪便稀等较其它组稍有改善：6次Trypl-HGF治疗后动物溃疡性结肠炎常见症状均明显好转，精神萎靡减轻，无便中带血，体重较模型对照组平均增加9.75±2.07g，差异有统计学意义(P<0.05)，Ty治疗组与模型对照组大鼠症状均无明显缓解。3次和6次Typl-HGF治疗组结肠大体标本积分分别为2.20±0.90和1.70±1.10，明显低于同期Ty治疗组(5.10±1.70，4.00±1.50)和模型对照组(5.30±1.30，4.30±1.20)(P<0.01)，且3次和6次Typl-HGF灌胃治疗相比较有统计学意义(P<0.05)。光学显微镜观察可见，3次灌胃后Typl-HGF治疗组与其它组相比，肠组织炎症减轻，溃疡面缩小，并可见粘膜及组织增生现象，组织学评分为3.87±0.76，但与Ty治疗组和模型对照组无明显差别(P>0.05)；6次Typl-HGF治疗后肠组织病理检查较3次治疗更好，溃疡边可见新生肉芽组织增生，有的甚至溃疡及黏膜已修复，组织学评分为1.60±0.30，而同期模型组标本积分为3.50±0.70，二者之间差异有统计学意义(P<0.05)，3次和6次Ty治疗组与模型对照组相比无明显改变。Typl-GFP灌胃后在结肠组织可见GFP强表达。 结论：1.口服Typl-HGF能降低了小鼠的细胞免疫和体液免疫，对正常小鼠免疫有抑制作用。2.Typl-HGF能明显减轻TNBS诱发溃疡性结肠炎模型大鼠的症状及炎症，对已形成的粘膜损伤及溃疡有促修复作用。同时大鼠实验性结肠炎发病过程中，机体免疫功能处于亢进状态，Typl-HGF能够抑制T增殖和B淋巴细胞抗体的产生，它可能代表了一种新的治疗用于治疗结肠炎疾病。

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