HGF基因治疗乙酸诱导溃疡性结肠炎大鼠实验研究

摘要

目的：评价携带肝细胞生长因子(HGF)基因的减毒沙门氏菌对大鼠溃疡性结肠炎模型的治疗作用. 方法：第一部分乙酸诱导建立40只Wistar大鼠溃疡性结肠炎模型，并随机分成四组：TypL-HGF治疗组(A组)，TypL-GFP治疗组(B组)，Ty治疗组(C组)模型对照组(D组)，另设一组正常对照组(E组)，每组10只。造摸后第3d开始灌肠治疗，A组给予1×109cfu Typl-HGF治疗，B组给予同剂量聊Typl-GFP治疗，C组给予同剂量Ty治疗，D、E组分别给予同体积的生理盐水灌肠，每3d一次，共3次。各组大鼠于造模后第12d断头处死，取结肠病变部位组织行常规HE染色，观察各实验组结肠的病理变化，并收集全血及血清，流式细胞仪检测全血中CD4+，CD8+T细胞含量，放免法检测血清中IL-2、IL-6、TNF-a水平的变化。 第二部分用免疫组化法检测各组HGF及c-Met基因的表达；荧光显微镜观察GFP基因在B组大鼠各脏器的表达；PCR法检测A组大鼠心、肝、脾、肾、胃、大肠等组织中CMV的表达。 结果： 1.肉眼观察可见B、C、D组大鼠肠管不同程度变粗，肠壁变薄，肠壁外周粘连严重，黏膜溃疡、糜烂严重，A组大鼠上述病变明显改善(P<0.01)；光镜下可见B、C、D组大鼠结肠溃疡形成较多，黏膜糜烂缺失严重，腺体破坏，坏死组织多见，黏膜肌层破坏，浆膜充血水肿，A组大鼠结肠溃疡数较B、C、D组减少，黏膜糜烂缺失程度轻，溃疡边可见新生肉芽组织增生，有的甚至黏膜已修复(P<0.05)。全血中CO4+/CD8+比值及血清IL-2、IL-6、TNF-a水平A组明显低于C，D组(P<0.05)。 2.免疫组化显示：A组大鼠结肠组织中HGF及c-Met基因的表达均强于其他组。 3.B组大鼠的肝脏，脾脏，肾脏，大肠，小肠中均可检测到绿色荧光蛋白的表达。 4.A组大鼠心、肝、脾、肾、胃、大肠等组织提取DNA中可扩增出CMV片段。 结论：1减毒沙门氏菌可以将HGF基因携带入大鼠体内表达。 2减毒沙门氏菌介导的HGF基因对大鼠溃疡性结肠炎有治疗作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文术语缩略词表

声明

前言

第一部分携带HGF基因的减毒沙门氏菌对乙酸诱导大鼠溃疡性结肠炎愈合作用以及对大鼠外周血CD4/CD8，血清中IL-2、IL-6、TNF-α含量的变化

前言

实验试剂和仪器

实验方法

实验结果

讨论

第二部分组织中HGF基因及GFP基因表达的检测

前言

实验试剂和仪器

实验方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

附图

致谢