1,25(OH)2D3对2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒细胞相关功能的影响

摘要

目的：研究1,25(OH)2D3对2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒细胞趋化、凋亡等功能的影响，以期为2型糖尿病合并牙周炎的发生、发展及临床治疗提供理论和实验依据。
　　方法：
　　1.严格按照2型糖尿病合并牙周炎的纳入标准选择44例患者作为研究对象。实验分为1,25(OH)2D3未干预组和1,25(OH)2D3干预组，按其作用浓度的不同又分为以下三组：10-6 mol/L、10-8 mol/L、10-10 mol/L干预组。
　　2.采用密度梯度离心法分离2型糖尿病伴牙周炎患者外周血中性粒细胞（Polymorphonuclear leukocytes, PMN），瑞氏-姬姆萨染色及台盼蓝拒染实验分别鉴定细胞纯度和检测细胞活力。
　　3.采用不同浓度1,25(OH)2D3作用于PMN24h后，分别运用Transwell系统检测PMN趋化、迁移能力；流式细胞术（FCM）检测PMN凋亡率及细胞内活性氧（Reactive oxygen species，ROS）的生成量；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）的含量变化。
　　结果：
　　1.成功分离2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN，瑞氏-姬姆萨染色示细胞纯度≥96％，台盼蓝染色示细胞活力＞98％。
　　2.不同浓度1,25(OH)2D3作用于 PMN24h，趋化剂甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（fMLP）趋化2h后发现，与1,25(OH)2D3未干预组相比，10-6 mol/L、10-8 mol/L1,25(OH)2D3干预组PMN趋化功能增强，差异有统计学意义（P<0.05），而10-10 mol/L1,25(OH)2D3干预组与1,25(OH)2D3未干预组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。10-6mol/L、10-8 mol/L、10-10 mol/L干预组两两比较发现，10-6 mol/L干预组＞10-8 mol/L干预组＞10-10 mol/L干预组，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　3.不同浓度1,25(OH)2D3作用于PMN24h后，流式细胞术（FCM）检测PMN凋亡率及细胞内 ROS生成量的结果显示，与1,25(OH)2D3未干预组相比，1,25(OH)2D3干预组 PMN凋亡率均升高，差异有统计学意义（ P<0.05）。1,25(OH)2D3干预组两两比较发现，10-8 mol/L干预组＞10-6 mol/L干预组＞10-10 mol/L干预组，差异有统计学意义（ P<0.05）；细胞内 ROS的检测显示，与1,25(OH)2D3未干预组相比10-6 mol/L1,25(OH)2D3干预组ROS的生成量增加，10-8 mol/L、10-10 mol/L1,25(OH)2D3干预组ROS的生成量减少，差异均有统计学意义（P<0.05）。
　　4. ELISA检测 PMN上清液中 TNF-α、IL-1β、IL-6、NE的结果显示，1,25(OH)2D3干预组TNF-α、IL-1β、IL-6、NE的水平均较未干预组低，差异有统计学意义（P<0.05）。1,25(OH)2D3干预组两两比较发现，10-8 mol/L干预组＜10-6 mol/L干预组，10-8 mol/L干预组＜10-10 mol/L干预组，差异有统计学意义（P<0.05），而10-6 mol/L干预组与10-10 mol/L干预组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：
　　1.10-6 mol/L、10-8 mol/L1,25(OH)2D3可能对2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN趋化有促进作用，且10-6mol/L1,25(OH)2D3作用较显著；
　　2.三种不同浓度的1,25(OH)2D3可能对2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN凋亡均有促进作用，且浓度为10-8 mol/L时作用较为显著；
　　3.1,25(OH)2D3可能会影响2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN ROS的生成量，10-6mol/L干预组ROS的生成量增加，而10-8 mol/L、10-10 mol/L干预组ROS的生成量减少，且10-8 mol/L干预组减少量较显著；
　　4.一定浓度的1,25(OH)2D3可能对2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN相关炎性因子的表达有抑制作用，且以10-8 mol/L1,25(OH)2D3抑制作用最为显著。
　　以上实验结果表明一定浓度的1,25(OH)2D3对2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN的趋化、凋亡等功能均有一定影响。由此可以推测1,25(OH)2D3作为一种免疫调节剂在2型糖尿病伴牙周炎的发生、发展中起免疫调节作用，但具体机制研究尚有待于进一步澄清。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料与仪器

1.2 实验方法

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 研究对象的基本临床特点

2.2 PMN形态与鉴定

2.3 PMN趋化实验

2.4 流式细胞术检测细胞凋亡

2.5 流式细胞术检测细胞活性氧的生成量

2.6 PMN培养上清液中炎性因子的含量变化

3 讨论

3.1 1, 25(OH)2D3对PMN趋化功能的影响

3.2 1, 25(OH)2D3对PMN凋亡及ROS生成量的影响

3.3 1, 25(OH)2D3对炎性微环境内PMN释放相关炎性介质的影响

4 结论

参考文献

综述: 维生素D对牙周炎的影响

致谢

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