1,25(OH)2D3激活P38MAPK信号通路诱导2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒细胞凋亡的作用机制

摘要

目的：
　　观察1，25-二羟维生素D3(1，25(OH)2D3)对2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒细胞凋亡及凋亡相关因子caspase-3,bax,bcl-2表达情况，探讨p38MAPK信号通路在1，25(OH)2D3对2型糖尿病伴牙周炎患者中性性粒细胞凋亡的调控机制。
　　方法：
　　2015年9月至2016年7月收集遵义市遵义医学院附属医院内分泌科有2型糖尿病并伴有牙周炎患者76例（男52例，女24例），采集患者外周血10ml，采用密度梯度离心法分离中性粒细胞，分为空白组（control组）、1,25(OH)2D3诱导组（medication组）、1,25(OH)2D3＋SB203580D诱导组（medication＋blocker组），使用流式细胞术（FCM）观察细胞凋亡情况,蛋白质印迹技术（Western Blot）检测p38MAPK信号通路相关蛋白p38、p-p38，凋亡蛋白 caspase-3、bax、bcl-2的表达；实时定量PCR(RT-PCR)检测p38、caspase-3、bax/bcl-2mRNA的表达。
　　结果：
　　1.FCM结果显示：通过使用浓度为10-8mol/L的1,25(OH)2D3作用于细胞24小时后，medication组凋亡率最高，medication组及medication＋blocker组凋亡率均高于control组，两两比较均有统计学意义（P<0.01）。
　　2.Western Blot结果显示：1,25(OH)2D3作用后，medication组磷酸化p38（p-p38）、caspase-3及bax蛋白表达最高，其次为medication＋blocker组，control组最低，bcl-2蛋白的表达medication组灰度值最低，其次为medication＋blocker组，control组最高。
　　3.RT-PCR结果显示：control组、medication组、medication＋blocker组p38mRNA水平组间比较无统计学差异（P＞0.05）；caspase-3、bax/bcl-2的mRNA水平在medication组高于control组和medication＋blocker组，medication＋blocker组高于control组，组间两两比较均有统计学意义（P<0.01）。
　　结论：
　　1.1,25(OH)2D3可通过激活P38MAPK信号通路诱导2型糖尿病伴慢性牙周炎患者中性粒细胞的凋亡。
　　2.1,25(OH)2D3作用于2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒细胞的凋亡存在其他的通路机制。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

材料与方法

1.1 主要实验设备及试剂

1.2 实验方法

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 病例统计

2.2 PMN形态图片

2.3流式细胞术检测细胞凋亡情况

2.4 Western Blot检测相关蛋白表达

2.5 RT-PCR检测后 p38、caspase-3、bax、bcl-2mRNA的表达

3 讨论

4 结论

参考文献

综述:牙周炎与p38丝裂原活化蛋白激酶通路的研究与进展

致谢

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