仙人掌、桑叶及蓝莓化学成分提取分离和小分子药物与BSA的相互作用研究

摘要

目的：采用多种色谱法分离纯化仙人掌、桑叶醇提物中的化合物，并对分离所得的化合物进行结构鉴定。采用高速逆流色谱技术结合葡聚糖凝胶色谱技术分离蓝莓干果醇提物中的化学成分，并对分离所得的样品进行纯度测定及定性鉴定。采用荧光光谱及紫外光谱法研究在接近人体生理环境的pH7.4的Tris-HCl缓冲液条件下研究苯佐卡因（BZC）与牛血清白蛋白（BSA）结合作用的机制。
　　方法：（1）仙人掌、桑叶用乙醇浸提后，用正相硅胶柱层析法、大孔吸附树脂层析法、葡聚糖凝胶柱色谱法、制备薄层色谱法（制备TLC）、制备高效液相色谱法对粗提物进行分离纯化。最后，分离得到的化合物经LC-MS及NMR鉴定分析。（2）蓝莓干果用1％盐酸酸化的60%乙醇浸提后，用葡聚糖凝胶色谱法及高速逆流色谱法对醇提取分离纯化，分离得到的化合物经UPLC测定纯度。（3）在接近人体生理环境的pH7.4的Tris-HCl缓冲液条件下，采用荧光光谱、同步荧光光谱、紫外吸收光谱对BZC与BSA的平衡常数、结合位点数n、结合距离进行测量。
　　结果：（1）经鉴定，仙人掌中5种化合物分别为邻苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate）、胡萝卜苷（adaucosterol）、5-甲氧基呋喃甲醇(5-Methoxy furan methanol)、2-(4羟基-3-甲氧基苯基)-乙基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)-ethy-l-O-β-D-gluco-pyranoside）、5-羟甲基糖醛（5-hydroxymethylfurfural）。（2）桑叶中2种化合物分别为羽扇豆醇（Lupeol）、二氢山奈酚（Dihydrokaempfero）。（3）从蓝莓干果中分离得到2个样品，经鉴定纯度分别为65.0%和90.0%。（4）苯佐卡因对牛血清白蛋白有很强的荧光猝灭作用，猝灭机理主要为静态猝灭。静态淬灭常数Kq分别为1.52×1012 L/(mol· s)（pH7.4,291 K）和1.39×1012 L/(mol· s)（pH7.4,310 K），结合位点数n约为1，结合距离为2.02 nm。
　　结论：（1）本研究采用4种色谱技术从仙人掌中分离得到5种化合物，其中除化合物Ⅱ外，其余均为首次从本植物中分离得到的化合物；本实验采用2种色谱技术从桑叶中分离得到2种化合物，其中化合物Ⅱ为首次从本植物中分离得到的化合物。本研究为仙人掌及桑叶化学成分及其生物活性研究奠定基础。（2）本研究采用高速逆流色谱法结合葡聚糖凝胶色谱法对蓝莓果实中的花青素进行了分离，为蓝莓中花青素的分离制备提供了一种简单、快捷、节省溶剂的方法，为蓝莓花青素的研究提供了基础。（3）本研究结果表明苯佐卡因使BSA荧光猝灭的原因是静态猝灭，苯佐卡因与BSA结合过程中未改变BSA的结构。该研究为探讨小分子药物合理用药提供了重要的用药研究论证，对体内药物作用机制、药物合成、新药的设计和筛选研究奠定了基础。同时为我们下一步进行天然产物活性小分子与大分子的相互作用研究提供了有益尝试。