双时相门冬胰岛素40注射液的研制及其生物学活性研究

摘要

目的：研制双时相门冬胰岛素40注射液；初步探讨双时相门冬胰岛素40注射液对T1DM大鼠血糖影响及其免疫调节作用。
　　方法：（1）通过处方研究和工艺开发研制出双时相门冬胰岛素40注射液，并对其制剂质量进行研究；（2）取I型糖尿病模型大鼠注射门冬40注射液，每日一次，连续干预6周；实验期间观察各组大鼠的一般状况，监测大鼠的体重、饮水量、排尿量、摄食量及空腹血糖；（3）在给药前、给药3周、给药6周，采用流式细胞术检测大鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞的变化，采用ELISA法检测大鼠血清IFN-γ、IL-10、TGF-β细胞因子的水平；给药6周后采用RT-PCR法检测大鼠外周血淋巴细胞Foxp3 mRNA的水平，HE染色法观察各组大鼠胰腺组织病理变化。实验同时设正常对照组、模型对照组和阳性药物对照组。
　　结果：（1）研制出的门冬胰岛素40注射液按药典和企业标准各项指标均符合要求，制剂稳定性良好；（2）实验组大鼠一般状况：实验组大鼠一般状况良好，“三多一少”典型症状改善明显，体重呈现上升的趋势，在第6周(258.4g)明显高于模型组大鼠(154.3g)(P<0.05)；胰腺组织HE染色结果显示，给予药物6周后，实验组大鼠胰岛组织相对较好，比正常的胰腺组织差，但比模型组好,与药物对照组相比，无明显差异；治疗7天后，实验组大鼠血糖(7.75mmol/L)显著低于模型组(24.93mmol/L)，第21天、42天实验组显著低于模型组(P<0.05)。（3）CD4+CD25+Treg细胞流式细胞术检测结果：药物干预6周后，实验组Treg细胞(1.84％)高于模型组(1.46%)具有明显差异性(P<0.05)，低于正常组(2.23%)有明显差异性(P<0.05)。（4）Foxp3 mRNA相对定量统计结果：给与药物治疗6周后，实验组(3.2368)明显高于正常组(P<0.05)，明显低于模型组(6.7928)(P<0.05)。（5）细胞因子检测结果：①给药6周后，实验组INF-γ含量(111.87pg/ml)比给药前低(140.04pg/ml)，明显低于模型组INF-γ含量(185.90pg/ml)(P<0.05)；②给药6周后，实验组IL-10含量(1.45ng/ml)比给药前高(1.15ng/ml)，高于模型组IL-10含量(0.93ng/ml)(P<0.05)；③给药6周后，实验组TGF-β含量(114.21pg/ml)比给药前高(97.19pg/ml)，高于模型组TGF-β含量(79.13pg/ml)(P<0.05)。
　　结论：（1）采用本方法研制的双时相门冬胰岛素40注射液质量稳定、均一；（2）双时相门冬胰岛素40注射液能降低I型糖尿病大鼠的血糖含量，减轻I型糖尿病大鼠“三多一少”的症状，减轻损伤 I型糖尿病大鼠的胰岛组织；（3）通过双时相门冬胰岛素40注射液治疗糖尿病大鼠，可提高CD4+CD25+Treg细胞数，上调Foxp3 mRNA表达；同时降低糖尿病大鼠IFN-γ，上调IL-10、TGF-β；通过细胞因子和Treg细胞免疫调节达到治疗效果。

目录

封面

声明

目录

中英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

第一部分双时相门冬胰岛素40注射液的研制

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

第二部分双时相门冬胰岛素40对T1DM大鼠血糖的影响

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

第三部分双时相门冬胰岛素40对T1DM大鼠CD4+CD25+Treg细胞及细胞因子的影响

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

综述: 糖尿病药物门冬胰岛素的研究进展

致谢

作者简介