钠氢交换体NHE1在高盐诱导血管平滑肌细胞增殖和钙离子调控中的作用

摘要

目的：本课题旨在观察钠氢交换体(Na+/H+ exchanger, NHE1)在高盐诱导的血管平滑肌细胞增殖中的表达，并初步探讨其在高盐诱导的血管平滑肌细胞增殖中作用。
　　方法：（1）盐浓度、NHE1阻断剂（Amiloride）浓度及作用时间的确定:取大鼠腹主动脉采用组织块贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMC），实验分为对照组(Na+浓度139mmol/L)，高盐组(Na+浓度159mmol/L)，高盐+阻断剂组（ Na+浓度159mmol/l+Amiloride浓度10μM、20μM、30μM、40μM）。利用MTT比色法检测不同浓度的Amiloride对高盐干预的VSMCs增殖的影响，以确定Amiloride的最佳干预浓度。（2）效应和机制分析:VSMCs无血清同步化24h后，实验分为对照组(Na+浓度139mmol/L)，对照+阻断剂组(Na+浓度139mmol/L+Amiloride浓度30μM)，高盐组(Na+浓度159mmol/L)，高盐+阻断剂组（Na+浓度159mmol/l+Amiloride浓度30μM）继续培养72h后进行以下实验：超微量Ca2+-ATPase测试试剂盒测定细胞膜钙泵活性；细胞免疫荧光、real-time PCR及Western Blot检测大鼠VSMC中NHE1、NCX-1、PMCA4基因与蛋白表达，应用比率荧光法检测各组VSMC内钙离子的浓度及细胞内pH值。
　　结果：MTT法显示高盐+阻断剂组（Amiloride浓度为30μM）增殖能力较高盐组明显减弱。与对照组比较，高盐组NHE1、NCX-1、PCNA蛋白表达增加，PMCA4蛋白表达降低，细胞内钙离子浓度及 pH值明显增加，（P﹤0.05）。同时，NHE1、NCX-1 mRNA表达增加（P﹤0.05），PMCA4 mRNA表达无明显差别（P﹥0.05）；与高盐组相比，高盐+阻断剂组NHE1、NCX-1、PCNA蛋白以及NHE1、NCX-1 mRNA表达下调（P﹤0.05），PMCA4蛋白和mRNA表达无明显差别（P﹥0.05），细胞内钙离子浓度及细胞内pH值明显降低（P﹤0.05）。
　　结论：（1）高盐能诱导大鼠血管平滑肌细胞发生增殖，并且细胞内游离钙离子浓度和pH值升高；
　　（2）高盐上调了 NHE1的表达，阻断细胞 NHE1的表达能够部分抑制高盐诱导VSMC的增殖，降低细胞内NCX-1的表达及细胞内游离钙离子浓度和pH值。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 主要实验仪器及设备

1.4 实验方法

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 大鼠VSMC培养及鉴定

2.2高盐对对大鼠VSMC增殖和NHE1受体表达的影响

2.3高盐对大鼠VSMC钙泵活性的影响

2.4 高盐对大鼠VSMC内游离钙离子浓度的影响

2.5 高盐对大鼠VSMCs内pH值的影响

2.4 阻断NHE1对高盐诱导的大鼠VSMC增殖和细胞内pH值和钙离子调控的影响

2.5高盐及阻断NHE1对大鼠VSMC NHE1、NCX-1、PMCA4 mRNA表达情况

2.6 阻断剂对大鼠VSMC内游离钙离子浓度的影响

2.7 阻断剂对大鼠VSMCs内pH值的影响

3 讨论

4.结论

参考文献

综述: 钠氢交换体1与心血管疾病的关系及其机制

致谢

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