URSA模型小鼠脾CD4+Th17/Treg细胞活化及细胞因子分泌的研究

摘要

目的：检测未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠及URSA模型小鼠脾脏CD4+Th17/Treg细胞活化水平及 IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23细胞因子分泌的变化。探讨CD4+Th17/Treg细胞及相关细胞因子与URSA的关系，为URSA患者制定免疫防治策略提供基础资料。
　　方法：建立URSA小鼠模型（♀CBA/J×♂DBA/2J），实验设未妊娠小鼠（♀CBA/J）和正常妊娠小鼠模型（♀CBA/J×♂Balb/c）；用免疫磁珠分选技术（MACS）将三组雌鼠脾脏中的CD4+T细胞分选出来，将分选的CD4+T细胞体外诱导活化为Th17/Treg两个细胞体系，流式细胞术（FCM）检测两个细胞体系的诱导活化情况；通过Luminex xMAP技术检测诱导活化后的细胞培养上清液及蜕膜、胎盘细胞研磨上清中IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23的分泌水平。用Western-Blot检测Th17/Treg两细胞体系及母-胎界面的蜕膜、胎盘细胞中IDO、FoxP3蛋白的表达水平。
　　结果：（1）FCM检测未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠和URSA模型小鼠脾脏中CD4+T细胞来源的Th17细胞的诱导结果分别为（0.32±0.19）％、（0.13±0.06）%、（0.72±0.38）%。URSA组Th17细胞明显高于未妊娠组和正常妊娠组。三组间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。三组CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的诱导结果分别为（0.38±0.15）%、（0.85±0.48）%、（0.17±0.12）%。URSA组CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞明显低于未妊娠组和正常妊娠组。三组间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。
　　（2）Luminex xMAP技术检测小鼠母-胎界面的蜕膜、胎盘细胞研磨上清中的细胞因子分泌水平：正常妊娠组IL-17A（9.90±5.04）pg/ml、IL-10（6.50±7.03）pg/ml、IL-23（14.84±11.41）pg/ml和URSA组IL-17A（14.00±16.73）pg/ml、IL-10（4.10±6.25） pg/ml、IL-23（17.52±16.15）pg/ml。而IL-21细胞因子分泌水平浓度低于检测下限（P>0.05）。三组小鼠诱导后的Th17/Treg细胞上清中的IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23细胞因子分泌水平的浓度均低于检测下限。
　　（3）Western Blot检测未妊娠小鼠、正常妊娠模型小鼠和URSA模型小鼠脾脏来源的CD4+T细胞诱导后的Th17/Treg细胞中IDO、FoxP3结果：URSA组IDO、FoxP3的表达均明显低于未妊娠组和正常妊娠组。三组间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。URSA组小鼠研磨的蜕膜、胎盘细胞中IDO、FoxP3蛋白表达均显著低于正常妊娠组。两组之间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：（1）URSA小鼠Th17细胞的活化分化增殖与URSA的发生相关，即Th17细胞数量上升不利于妊娠维持；正常妊娠表现为CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞偏移现象，在URSA时CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞数量降低则不足以维持妊娠。
　　（2）URSA小鼠脾CD4+T细胞活化后分泌IL-17A和IL-23与URSA的发病有关，且两者的增加可能诱使URSA发生；IL-10分泌升高则可维持正常的妊娠。
　　（3）URSA小鼠的蜕膜、胎盘细胞中IDO、FoxP3蛋白表达较正常妊娠组均显著降低，监测URSA患者再孕时早孕期的IDO变化可预测妊娠结局。

目录

封面

声明

目录

中英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

1 材料与方法

1.1 实验对象

1.2 主要实验材料

1.3 主要实验试剂

1.4 实验方法

1.5统计学方法

2 结果

2.1 FCM检测小鼠CD4+T细胞诱导活化的Th17细胞和Treg细胞结果

2.2 Luminex xMAP检测IL-17A、IL-10、IL-21、IL-23结果

2.3 Western Blot检测IDO、FoxP3蛋白的表达结果

3 讨论

4 结论

参考文献

综述: 吲哚胺2,3-双加氧酶与URSA关系的研究进展

致谢

作者简介