人参皂甙Rg1对人牙周膜细胞生物学活性及大鼠牙周组织相关细胞因子表达的影响

摘要

目的： 1、研究玻片覆盖法原代培养人牙周膜细胞的成功率及生物学性状；在此基础上研究人参皂甙Rg1对原代培养的人牙周膜细胞生物学活性的影响。 2、通过给Wistar大鼠肌注糖皮质激素及牙间结扎钢丝建立一种近似人类临床牙周炎的动物模型，研究人参皂甙Rg1对大鼠实验性牙周炎模型的牙周组织中白介素6(IL-6)、骨钙素(BGP)表达的影响。 方法： 1、利用形态学、免疫组化方法来观察玻片覆盖法原代培养人牙周膜细胞的成功率及其生物学特性，并鉴定其来源。 2、在体外培养人牙周膜细胞的基础上，采用噻唑蓝(MTT)比色法、考马斯亮蓝法、酶动力学方法探讨人参皂甙Rg1对原代培养的人牙周膜细胞增殖活性、蛋白合成、碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。 3、采用流式细胞技术观察人参皂甙Rg1对体外培养人牙周膜细胞细胞周期的影响。 4、体外培养人牙周膜细胞经钙荧光指示剂Fluo-3负载后，用激光扫描共聚焦显微镜测定人参皂甙Rg1影响前后的细胞内游离钙离子浓度随时间变化情况。 5、选用100只体重160-200g Wistar大白鼠，随机分成10组，每组10只。A组：正常对照组，于实验开始(0周)时处死。B-E组：人参皂甙Rg1治疗组。F-J组：牙周炎对照组。B-E组分别于牙周炎模型建立并给药后第1、2、3、4周处死，每次一组。F-J组分别于牙周炎模型建立后第0、1、2、3、4周处死，每次一组。切取大鼠上颌磨牙牙周组织标本作切片，免疫组织化学方法对IL-6、BGP进行染色，光镜观察，测量灰度值，进行统计学分析。 结果： 1、玻片覆盖法可显著提高人牙周膜细胞原代培养的成功率。 2、人参皂甙Rg1对牙周膜细胞生长增殖的影响 与对照组相比人参皂甙Rg10.005/μmol/L，0.01/μmol/L，0.05/μmol/L，0.1/μmol/L，1/μmol/L组均能明显促进细胞增殖(P<0.05)，且在0.01-0.05/μmol/L浓度范围内作用时间最长。 3、人参皂甙Rg1对牙周膜细胞蛋白含量的影响 与对照组相比人参皂甙Rg10.01μmol/L，0.05μmol/L，0.1μmol/L组72小时细胞培养液中蛋白含量均明显高于对照组(P<0.05)。 4、人参皂甙Rg1对牙周膜细胞ALP活性的影响： 与对照组相比人参皂甙Rg10.01μmol/L，0.05μmol/L，0.1μmol/L组72小时细胞培养液中ALP活性均明显高于对照组(P<0.05)。 5、人参皂甙Rg1对牙周膜细胞内游离钙离子浓度的影响： 人参皂甙Rg1(0.01μmol/L)使人牙周膜细胞内游离钙离子降低，最后维持在比加药前低的静息钙水平上。 6、人参皂甙Rg1对细胞周期的影响： FCM检测显示经0.01μmol/L人参皂甙Rg1作用48h后，牙周膜细胞G1期细胞降低(P<0.05)，S期细胞升高且细胞增殖指数PrI值(S+G2/M)％显著增高(P<0.05)。 7、大鼠实验性牙周炎动物模型的成功建立： 动物采用牙间结扎加激素注射第4天后便出现了进食减少、倦怠少动等表现，符合中医肾虚的症状，并且出现了牙槽骨疏松、牙槽嵴吸收、牙周袋形成等病理性改变。正常组大鼠则无上述表观。牙周炎组牙周组织中BGP表达明显低于正常组，IL-6表达明显高于正常组(P<0.05)。 8、人参皂甙Rg1对大鼠牙周组织中有关细胞因子表达的影响： 从治疗第二周起，治疗组较牙周炎对照组牙周组织中的BGP水平明显升高(P<0.05)；治疗第三周起，治疗组较对照组牙周组织中的IL-6水平显著降低(P<0.05)，经治疗后的实验动物全身状况也显著改善。 结论： 玻片覆盖法可显著提高人牙周膜细胞原代培养的成功率。人参皂甙Rg1在一定浓度范围内能提高牙周膜细胞的增殖活性、蛋白合成及碱性磷酸酶活性。人参皂甙Rg1使牙周膜细胞G1期细胞减少，S期细胞增加，细胞增殖指数PrI值(S+G2/M)％增高，促进更多的细胞进人增殖状态，且人参皂甙Rg1可能通过改变细胞内游离钙离子的浓度，达到其促进细胞增殖的作用。牙间结扎加糖皮质激素注射的方法可成功地建立近似于人类临床牙周炎的动物模型，为下一步研究中药防治牙周炎提供了很好的实验基础。大鼠实验性牙周炎模型牙周组织中IL-6含量较正常对照组明显升高，BGP含量较正常对照组明显降低，应用人参皂甙Rg1能显著抑制实验性牙周炎模型牙周组织中IL-6的表达，同时升高BGP的含量。根据上述结果证实人参皂甙Rg1可促进创伤愈合和组织再生，具有治疗牙周炎并改善全身状况的作用，从而为人参皂甙Rg1治疗牙周病的临床合理用药提供科学依据。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

第一部分 人参皂甙Rg1对体外培养的人牙周膜细胞生物活性影响

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

第二部分 人参皂苷Rg1对大鼠牙周炎模型牙周组织中IL-6、BGP表达的影响

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

全文小结

参考文献

文献综述 人参皂苷Rg1在牙周病治疗中的意义

攻读学位期间的研究成果

致谢

附录