NSCLC-TKIs耐药中miR-125a-5p与上皮间质转化关系的研究

摘要

目的：
　　探讨NSCLC细胞中是否存在miR-125a-5p参与调控上皮间质转化过程，从而导致其发生EGFR-TKIs耐药，对miR-125a-5p与上皮间质转化在EGFR-TKIs耐药中的关系进行研究。
　　方法：
　　运用慢病毒感染技术感染耐厄洛替尼的NSCLC细胞株PC9ER，将其分为miR-125a-5p上调组（PC9ER-miR-125a-5p）和miR-125a-5p下调组（PC9ER-shRNA-miR-125a-5p），镜下观察细胞形态，划痕实验探讨细胞迁移能力，采用Western blot及RT-PCR方法与厄洛替尼敏感的肺腺癌细胞株PC9、耐厄洛替尼的肺腺癌细胞株PC9ER比较各组细胞中EMT标志物（E-cadherin、Vimentin、ZEB1、Snail）在蛋白及mRNA表达情况。
　　结果：
　　1.相较于PC9ER及上调miR-125a-5p的PC9ER细胞，下调miR-125a-5p后， PC9ER细胞形态发生长梭形转变，且细胞大小差异较大；划痕实验发现随着时间推移，下调miR-125a-5p的PC9ER细胞划痕间距明显变窄。
　　2.在E-cadherin mRNA表达水平方面：PC9ER细胞中E-cadherin表达较PC9细胞低（P<0.0001）；上调miR-125后，与PC9ER细胞相比其E-cadherin表达明显增加（P<0.0001)；PC9ER-shRNA-miR-125a-5p细胞中 E-cadherin表达则较PC9ER-miR-125a-5p细胞降低（P=0.03)；
　　3..检测 Vimentin mRNA表达水平结果显示：与PC9细胞相比，PC9ER细胞中Vimentin表达升高（P=0.03）；PC9ER-miR-125a-5p细胞相较于PC9ER细胞，Vimentin表达水平反而降低（P=0.03）；与PC9ER-miR-125a-5p细胞相比，下调miR-125a-5p细胞中Vimentin表达复升（P=0.007）；
　　4.Snail、Zeb1 mRNA表达水平仅在PC9ER-miR-125a-5p及PC9ER-shRNA-miR-125a-5p两组对比中存在显著性差异：相较于PC9ER-miR-125a-5p细胞，Snail及Zeb1均在PC9ER-shRNA-miR-125a-5p中表达增加（P=0.0071，P=0.023）；
　　5.在蛋白水平表达方面：PC9及PC9ER-miR-125a-5p两组细胞中E-cadherin表达上调，Vimentin、Snail、Zeb1均在PC9ER和PC9ER-shRNA-miR-125a-5p细胞中表达增加。
　　结论：
　　在耐厄洛替尼肺腺癌细胞中，miR-125a-5p可引起EMT相应的继发性改变。伴随着间质特征性蛋Vimentin及EMT相关转录因子Snail、Zeb1表达增加、上皮特征性蛋白E-cadherin表达降低；miR-125a-5p参与调控EMT过程，可能是NSCLC-TKIs耐药的原因之一。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 实验方法

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 慢病毒成功转染目的细胞

2.2 细胞形态学观察情况

2.3 细胞迁移实验

2.4 RT-PCR 检测EMT标志物mRNA水平表达情况

2.5 Western blot检测EMT标志物蛋白水平表达情况

3 讨论

4 结论

参考文献

综述:上皮间充质转化研究进展

致谢

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