茶多酚对人牙槽骨成骨细胞增殖以及成骨细胞相关基因表达的影响

摘要

目的：通过观察不同浓度茶多酚（tea polyphenols，TP）对健康人牙槽骨成骨细胞（human alveolar osteoblasts，HAOB）增殖以及成骨细胞（osteoblasts，OB）相关基因Runt相关转录因子2（runt related transcription factor2，RUNX2）、成骨细胞特异性转录因子（osterix，OSX）、组织非特异性碱性磷酸酶（tissue-nonspecific alkaline phosphatase，TNAP）、Ⅰ型胶原蛋白α1链（collagen typeⅠ alpha1，COL1A1）、骨钙素（osteocalcin，OCN）和骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein2，BMP2）基因表达的影响，研究TP对健康HAOB增殖以及OB相关基因的影响，寻求一种简单安全可靠的方法保持牙周组织健康，甚至修复已破坏的牙周组织，为进一步研究TP对口腔疾病和骨代谢相关疾病的治疗提供实验基础和理论依据。
　　方法：
　　1.通过改良的预消化组织块培养法体外培养健康 HAOB，进行形态学观察，并采用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）偶氮偶联法和细胞茜素红钙染色法进行细胞鉴定；
　　2.采用细胞增殖—毒性检测试剂盒（cell counting kit8，CCK-8）检测不同浓度TP对健康HAOB增殖的情况；
　　3.采用实时荧光定量聚合酶链反应（ real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ PCR）检测OB相关基因RUNX2、OSX、TNAP、COL1A1、OCN和BMP2基因的表达情况。
　　结果：
　　1.应用改良的预消化组织块培养法体外培养健康HAOB，约5天左右可见HAOB从骨粒边缘游出，多为三角形和梭形、体积较大、椭圆形单核、见1~3个核仁、无接触抑制等形态特征符合OB；ALP偶氮偶联法鉴定达90％的细胞阳性表达；细胞茜素红钙染色法鉴定呈阳性。
　　2. CCK-8结果表明：48 h时各浓度TP对HAOB均有明显促进细胞增殖的作用（P<0.05），而且比24 h和72 h促进效果更佳；24 h、48 h和72 h时均在100μg/ml TP作用下对细胞增殖的促进效果更好（P<0.05）；24 h和72 h时在低浓度TP作用下促进作用不显著，甚至在102μg/ml TP影响下出现抑制作用（P<0.05）；在10-4μg/ml~100μg/ml TP浓度范围内呈浓度依赖性促进细胞增殖。
　　3. RUNX2的相对表达量与实验第二部分促进 HAOB的增殖情况基本吻合；OSX、COL1A1、OCN和BMP2在72 h时1.0μg/ml TP组的相对表达量较24 h和48 h时有所增高；COL1A1和OCN相对表达量的趋势类似。
　　结论：采用改良的预消化组织块培养法可以成功体外培养出 HAOB；不同浓度 TP对HAOB增殖的影响不同，在10-4μg/ml~100μg/ml（0.0001μg/ml~1μg/ml）TP浓度范围内促进细胞增殖呈浓度依赖性，尤其100μg/ml（1μg/ml）TP比其他浓度的促进细胞增殖作用更强，但随着浓度增加会出现抑制现象，并且在48 h时促进作用比24 h和72 h时效果更佳；TP对OB的增殖可能与RUNX2的表达呈正相关，而且72 h时在1.0μg/ml（1μg/ml）TP的影响下，TP可以促进OSX、COL1A1、OCN和BMP2的表达增加。

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前言

第一部分人健康牙槽骨成骨细胞的培养及鉴定

1 材料与方法

2 结果

第二部分茶多酚对人牙槽骨成骨细胞增殖的影响

1 材料与方法

2 结果

第三部分茶多酚对成骨细胞相关基因表达的影响

1 材料与方法

2 结果

讨论

结论

参考文献

综述: 茶多酚类化合物在口腔常见疾病发生发展中的作用研究现状

致谢

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