一种新黄酮类化合物((2S)-8-异戊烯基-7，2'，4'-三羟基5-甲氧基二氢黄酮)的抗血管生成作用及其机制研究

摘要

血管生成以内皮细胞活化、细胞外基质降解、内皮细胞迁移、增殖、最终形成血管样结构为主要特征，是受多种因素调节的复杂的生理和病理过程。天然黄酮类化合物是植物体多酚类的内信号分子及中间体或代谢物，种类繁多，结构复杂，具有广谱的药理活性和较低毒性，对于人类肿瘤，心血管疾病等病的治疗和预防有重要意义。本文探讨从苦参中提取的黄酮类化合物(2S)-8-异戊烯基-7，2'，4'-三羟基5-甲氧基二氢黄酮(SF-45)对血管生成的影响及作用机理。
　　 结果表明：(1)10μg/ml的SF-45不影响ECV304细胞的增殖，但是当其浓度达到20μg/ml时对ECV304细胞的增殖表出现为促进作用，当浓度达到30，40，50μg/ml时有明显的抑制作用；(2)同样低浓度的SF-45(10、20、30μg/ml)对ECV304细胞的迁移没有明显的作用，当浓度达到40，50μg/ml时，出现明显的抑制作用；(3)SF-45对于ECV304细胞粘附抑制作用较为明显，呈现浓度依赖性，在10μg/ml时就有明显的抑制作用，浓度升高，抑制作用加强，到50μg/ml时抑制作用最强；(4)SF-45对于ECV304细胞的管样结构的形成同样有明显的抑制作用，在10，20μg/ml时，抑制作用较为明显，当浓度达到30、40、50μg/ml时，抑制作用最强；(5)SF-45抑制鸡胚尿囊膜(chicken chorillantoic membrances，CAM)在体实验模型的血管生成，同对照组比较，加药组的血管粗细和密度都呈现抑制作用；(6)SF-45对ECV304细胞内的活性氧(reactive oxygen species，ROS)的影响同样是低浓度10μg/ml时没有明显的作用，随着浓度的增高，在20、30、40、50μg/ml各个浓度都出现了明显的抑制作用；(7)SF-45对于细胞内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表达的影响无浓度依赖性，在10μg/ml时就已经出现明显的抑制作用，到20μg/ml时，抑制作用达到最强，30、40、50μg/ml时的抑制作用与20μg/ml时的作用无明显差异；(8)流式细胞术分析表明，SF-45可以引起ECV304细胞周期阻滞在G1期。
　　 结论：(1)SF-45可以在体外抑制ECV304细胞增殖、迁移、粘附以及管样结构形成，并在体内试验模型鸡胚尿囊膜中，具有抗血管生成作用；(2)SF-45可能通过抑制细胞内ROS生成和VEGF表达，发挥抗血管生成作用。总之，许多疾病如肿瘤、慢性炎症、糖尿病等的发生发展都依赖于血管生成，因此抑制血管生成有助于这些疾病的治疗；而对于许多缺血性疾病如冠状动脉缺血、急性下肢缺血和脑梗塞等来说，通过促进血管生成可使症状改善。本研究结果表明SF-45值得作为一种潜在的抗血管生成药物进行进一步深入研究。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语

声明

前言

1.黄酮类化合物的药理活性

1.1.黄酮类化合物的结构及分类

1.2.黄酮类化合物的抗氧化作用及作用机理

1.3.黄酮类化合物的抗炎作用及作用机理

1.4.黄酮类化合物的抗肿瘤作用及作用机理

2.血管生成在肿瘤生长与转移中的作用

3.血管生成的调控

3.1.蛋白水解酶调节基底膜降解

3.2.血管生成因子调节内皮细胞增殖及迁移

3.3粘附分子影响细胞与细胞间，细胞与细胞外基质间相互作用

4.活性氧与血管生成

4.1.活性氧(reactive oxygen species，ROS)的产生和代谢

4.2.ROS调节血管生成

4.3.抗氧化剂的抗血管生成作用

5.抗血管生成治疗

5.1.内皮细胞入侵，迁移和粘附的抑制剂

5.2.内皮细胞活性抑制剂

5.3.血管生长因子与受体结合抑制剂

材料和方法

1.试剂和仪器

2.细胞培养

3.细胞增殖试验——SRB法

4.细胞迁移试验——刮除法

5.细胞粘附试验

6.管样结构(tube-like structure)形成试验

7.鸡胚尿囊膜(chicken chorillantoic membrances，CAM)实验

8.ROS测定

9.酶联免疫法测定血管内皮生成因子VEGF表达

10.细胞周期分析

结果

1.1.SF-45对内皮细胞增殖的影响

1.2.SF-45对内皮细胞迁移的影响

1.3.SF-45抑制内皮细胞对细胞外基质的粘附

1.4.SF-45对内皮细胞管样结构形成的影响

1.5.SF-45抑制CAM新生血管形成

1.6.SF-45降低内皮细胞ROS水平

1.7.SF-45对于细胞VEGF表达的影响

1.8.SF-45对于细胞周期的影响

讨论

1.1. SF-45抑制血管生成

1.2. SF-45抑制血管生成的可能机制与ROS、VEGF和细胞周期阻滞有关

1.3. SF-45构型讨论

结论

参考文献

致谢