川崎病Th17、Treg细胞异常机制的初探

摘要

目的：研究川崎病(Kawasaki disease，KD)患儿Th17、Treg细胞异常机制。
　　方法：KD患儿急性期42例，正常同年龄对照组32例，KD患儿分别于IVIG治疗前、后直接取血备检。
　　1.采用免疫共沉淀-荧光定量 PCR及印迹法检测外周血 CD4细胞 IL-17基因H3K4me3、H3K27me3修饰水平和IL-17基因组蛋白H3乙酰化、Foxp3蛋白泛素化水平；
　　2.流式细胞术检测CD4+IL-17+细胞/辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)比例及Foxp3、IL-10、IL-17、HIF-1α、pSTAT3蛋白表达水平；
　　3.实时荧光定量PCR检测CD4+T细胞IL-17、IL-6Rα、gp130、IL-23R、IL-23Rβ1、ETV5、SOCS1、SOCS3、TLR4、MyD88/TRIF、TNFR1、RIP1、RORγt、p300 mRNA及miR155表达；
　　4.血浆中用ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-23、IL-21、IL-6浓度。
　　结果：1.KD患儿急性期Th17细胞比例、IL-17蛋白表达及H3K4me3水平显著增高、H3K27me3水平明显降低(P<0.05)，且H3K4me3/H3K27me3比值与IL-17 mRNA水平呈正相关关系(r=0.69, P<0.05)，其中 KD合并冠状动脉损伤组（KD-CAL+）Th17细胞比例、IL-17表达及H3K4me3水平均高于无冠状动脉损伤组（KD-CAL-）、H3K27me3水平则低于后者(P<0.05)，Treg细胞比例及转录因子Foxp3、IL-10表达明显降低，Th17/Treg细胞比值远高于对照组(P<0.05)，经IVIG治疗后均明显恢复(P<0.05)；
　　2.KD患儿急性期CD4+T细胞pSTAT3、ETV5、miR155表达均显著上调(P<0.05)， pSTAT3负性调节因子SOCS1、SOCS3表达明显降低(P<0.05)，其中KD-CAL+组前三项表达均高于KD-CAL-组(P<0.05)，而后二项表达则明显低于后者(P<0.05)，IVIG治疗后都有不同程度恢复(P<0.05)；
　　3.KD患儿急性期血浆IL-1β、IL-6、IL-21、IL-23、TNF-α浓度及CD4+ T细胞pSTAT3、TLR4/MyD88/TRIF、IL-6Rα/gp130、IL-23R/IL-23Rβ1、TNFR1/RIP1表达均显著上调(P<0.05)，其中KD-CAL+组前述多项均高于KD-CAL-组(P<0.05)，经IVIG治疗后均明显降低(P<0.05)；
　　4.KD患儿急性期CD4+T细胞IL-17基因组蛋白H3乙酰化水平及Foxp3蛋白泛素化水平显著上升(P<0.05)，HIF-1α、RORγt及p300表达对于同年龄对照组也明显增高(P<0.05)，IVIG治疗后可见下降(P<0.05)。其中，HIF-1α表达与IL-17基因组蛋白 H3乙酰化水平、Foxp3蛋白泛素化水平呈正相关关系(r=0.65,0.52;P<0.05)；
　　结论：IL-17基因组蛋白甲基化修饰异常改变可能与急性期KD患儿免疫功能紊乱有关，而HIF-1α信号异常活化可能是导致急性期KD患儿Th17/Treg细胞失衡的重要因素之一。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

1 研究对象和方法

1. 1 研究对象

1.2 实验仪器和试剂

1.3 方法

2 结果

2.1 急性期KD患儿Th17细胞、IL-17基因H3K4me3/H3K27me3检测的结果

2.2 IL-17基因组蛋白乙酰化、Foxp3蛋白泛素化及HIF-1α信号相关分子检测结果

2.3 IL-17基因H3K4me/H3K27me3相关因子检测结果

2.4 急性期KD患儿Th17、Treg细胞及功能相关因子检测结果

2.5 HIF-1α相关的炎症因子及TLR信号检测结果

3 讨论

3.1 川崎病IL-17基因组蛋白甲基化修饰的改变意义

3.2 川崎病Th17/Treg细胞失衡中HIF-1α信号活化的作用

4 结论

参考文献

综述:川崎病流行病学及发病机制研究进展

致谢

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