肽类大麻素CB1受体激动剂(m)VD-Hpα对大鼠睡眠觉醒行为的调控

摘要

内源性大麻素系统（endogenous cannabinoid system,ECS）是参与情绪、食欲、认知、自主行为及植物神经调节的中枢网络调控系统。研究表明多种外源性或内源性大麻素参与睡眠觉醒时相的调节，除大麻二酚（cannabidiol,CBD）外大部分大麻素具有促眠作用。(m)VD-Hpα[VDPVNFKLLSH-OH，(m)VD-hemopressin(α)]是近期小鼠脑组织中提取的神经肽提示为大麻素CB1受体激动剂，具有镇痛、降压、降体温、降低活动度等作用，但是否参与睡眠觉醒行为的调控有待探明，本研究目的是揭示(m)VD-Hpα对大鼠睡眠觉醒时相调节作用及可能机制。
　　方法：大鼠活动期（dark/active phase）20:00h侧脑室（ICV）分别注射13.4、20.1、40.2nmol(m)VD-Hpα和等剂量溶剂saline作为对照，ICV注射7.5nmol WIN55,212-2与等剂量溶剂vehicle(蓖麻油：二甲基亚砜：生理盐水=1：1：18)非肽类大麻素CB1受体激动剂作为阳性对照，记录EEG与EMG解析上述药物对大鼠24h睡眠觉醒时相的改变。利用即刻早基因c-Fos标记(m)VD-Hpα与WIN55,212-2引起睡眠觉醒调节相关脑区活动神经元的分布。
　　结果：
　　1.与saline组比较，13.4、20.1、40.2nmol(m)VD-Hpα均缩短异相睡眠(paradoxical sleep,PS)或称快动眼睡眠(rapid eye movement sleep,REMS)潜伏期和增加给药后4h PS时间，但慢波睡眠(slow wave sleep,SWS)潜伏期和时间无显著改变。量效分析显示20.1nmol增加PS的24h时间计算总量最为显著，EEG解析发现其主要通过增加PS片段发生次数，而不改变PS片段平均持续时间。
　　2.昼夜睡眠结构分析发现最佳剂量20.1nmol(m)VD-Hpα导致PS增加主要发生在大鼠活动期(dark/active phase)，24h的睡眠觉醒周期PS计算总量比saline组显著增加。而WIN55,212-2(7.5nmol)引起的PS增加主要推迟到大鼠非活动期(light/inactive phase)，24小时PS总量比vehicle组显著增加。
　　3.(m)VD-Hpα增加VLPO和PPT Fos-ir神经元，减少LH Fos-ir神经元，而WIN55,212-2增加VLPO和LDT的Fos-ir神经元。
　　结论：活动期中枢注射(m)VD-Hpα增加大鼠活动期PS时间，其主要通过缩短PS潜伏期，增加PS片段发生次数，不改变PS片段平均持续时间。而WIN55,212-2增加PS滞后到大鼠非活动期。(m)VD-Hpα可能通过增强LH、VLPO、PPT调节PS神经元活动改变睡眠觉醒时相；而WIN55,212-2通过增强VLPO和LDT神经元活动调节睡眠觉醒时相的。

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前言

大麻素和内源性大麻素系统

1.大麻素

2.内源性大麻素系统

作用于ECS的物质以及(m)VD-Hpα和 WIN55212-2

1.作用于ECS的物质

2. (m)VD-Hpα和 WIN55212-2

睡眠觉醒的调控

大麻素与睡眠

c-Fos

研究目的

材料与方法

1. 材料

1.1.主要实验仪器

1.2.药品与试剂

1.3.实验动物

2. 方法

2.1. EEG/EMG电极埋植及侧脑室注射导管植入

2.2. EEG/EMG数据记录与解析

2.3实验分组及给药方法

2.4.注射点组织学鉴定

2.5.c-Fos免疫组化

2.6. 数据处理方法

结果

1. (m)VD-Hpα和WIN55,212-2对大鼠24小时睡眠觉醒时相调节作用

1.1. (m)VD-Hpα对大鼠24小时睡眠觉醒时相调节作用

1.2.WIN55,212-2对大鼠24小时睡眠觉醒时相调节作用

2.(m)VD-Hpα和WIN55,212-2对大鼠睡眠潜伏期的作用

3. (m)VD-Hpα引起PS增加的方式

4.(m)VD-Hpα和WIN55,212-2对大鼠24小时睡眠觉醒时相的累计效应

4.1. (m)VD-Hpα对大鼠24小时睡眠觉醒时相的累计效应

4.2. WIN55,212-2对大鼠24小时睡眠觉醒时相的累计效应

5. (m)VD-Hpα和WIN55,212-2引起活动神经元在睡眠觉醒调控关键脑区的分布

讨论

结论

参考文献

在校期间研究成果

致谢