β-淀粉样蛋白25-35诱导HT22细胞发生内质网应激及二苯乙烯苷的保护作用

摘要

目的：阿尔茨海默病(AD)是一种老年人常见的痴呆类型，以进行性认知功能障碍和行为异常为特征的神经系统退行性病变。脑组织里出现大量老年斑以及神经原纤维缠结是AD主要的病理学特征。其中，β-淀粉样蛋白(β-amyloid peptide，Aβ)作为老年斑的主要成分，具有非常严重的神经毒性，所以影响着AD的形成和发展。有研究显示内质网应激的三个通路蛋白表达状态变化，将导致细胞的凋亡，进而引发疾病。本实验通过建立AD细胞模型，研究Aβ25-35诱导HT22细胞内质网发生应激时，介导内质网应激的三个通路蛋白表达水平的变化及二苯乙烯苷（Tetrahydroxy stilbene glycoside,TSG）对其的保护作用。
　　方法：将HT22细胞分为未分化组和分化组，未分化组加入完全培养基培养48小时，分化组为完全培养基贴壁生长24小时后加入分化液（Neurobasal培养基和N2添加剂）培养24小时后，Western blot检测两组细胞的ATF6、PERK、IRE1蛋白表达量的变化。不同浓度的Aβ25-35分别作用于两组HT22细胞24小时，用MTT测定细胞活力变化。确定最佳AD细胞模型，将分化型HT22细胞分为对照组、Aβ处理组和Aβ＋TSG组，最佳抑制浓度的Aβ25-35作用于HT22细胞24小时，加入TSG(0、100、300、500μmol/L)用MTT测定细胞活力变化，免疫细胞荧光检测内质网应激三个通路蛋白的表达位置，及Western blot检测ATF6、PERK、IRE1蛋白表达量的变化。
　　结果：⑴ATF6、PERK、IRE1蛋白在未分化组的表达量明显高于分化组的表达量。Aβ25-35对未分化组细胞虽有损伤作用，但各组间无明显差异，且无剂量依赖关系。Aβ25-35可以诱导分化组HT22细胞发生损伤，且呈剂量依赖关系，Aβ25-35(20μmol/L、40μmol/L)作用于分化组HT22细胞24小时，细胞存活率分别为66％、60%，AD模型最佳。⑵Aβ25-35可以诱导HT22细胞发生内质网应激，且这种内质网应激同Aβ的浓度具有一定的相关性。免疫细胞荧光检测ATF6、PERK、IRE1在细胞核及细胞浆内均有表达。ATF6、PERK蛋白的表达在Aβ处理组增加，在Aβ＋TSG组减少。
　　结论：Aβ25-35可诱导分化型HT22细胞建立AD细胞模型，且浓度为20μmol/L最佳。Aβ25-35可诱导HT22细胞发生内质网应激，且TSG对其有保护作用。