淫羊藿苷联合左旋多巴对6-羟基多巴胺诱导的帕金森病大鼠模型的影响

摘要

目的：观察淫羊藿苷（Icariin, ICA）联合左旋多巴（L-3, 4-Dihydroxyphenylalanine, L-DOPA ）对6-羟基多巴胺（ 6-hydroxydopamine, 6-OHDA ）诱导的帕金森病（Parkinson’s disease, PD）大鼠模型的作用。 方法：(1) 细胞实验：由6-OHDA诱导PC12细胞损伤模型，实验随机分为空白组、6-OHDA（100μM）组、6-OHDA+ICA（0.1μM）组、6-OHDA+L-DOPA （50μM）组、6-OHDA+L-DOPA（100μM）组、6-OHDA+ICA+L-DOPA（50μM）组和6-OHDA+ICA+L-DOPA（100μM）组。MTT法检测细胞活力。比色法检测细胞内LDH活性。蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测相关凋亡基因BAX和Bcl2蛋白的表达水平。 (2) 动物实验：SD大鼠中脑黒质单侧注射6-OHDA（8μg）制备帕金森病模型，实验随机分为六组：空白组、ICA（20 mg/kg）组、模型组（6-OHDA，8μg）、6-OHDA+ICA（20 mg/kg）组、6-OHDA+L-DOPA（25 mg/kg）组、6-OHDA+ICA（20 mg/kg）+L-DOPA（25 mg/kg）组。大鼠连续腹腔注射L-DOPA和灌胃ICA ，每天一次共21 天。用免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶（ tyrosine hydroxylase, TH）的表达，观察给药第7、21天对多巴胺（dopamine, DA）能神经元的数量变化。高效液相电化学法检测大鼠纹状体 DA ，二羟苯乙酸（dihydroxyphenylacetic acid, DOPAC），高香草酸（homovanillic acid, HVA）的含量。行为学检测异常不自主动作(abnormal involuntary movement, AIM)，前肢运动功能测定(跨步实验)和转棒实验。蛋白免疫印迹法（Western blotting）测定中脑黑质炎症因子COX-2, IL-1β和TNF-α的蛋白表达。 结果：(1) 细胞实验：与空白组比较，6-OHDA组PC12细胞数量急剧减少，细胞内LDH明显增多，Bax/Bcl-2比例显著升高；经ICA处理后，PC12细胞数量有所增加，细胞内LDH减少；经L-DOPA处理后，细胞内LDH，Bax/Bcl-2比例没有变化；经ICA联合L-DOPA处理后，PC12细胞数量明显增加，细胞内LDH和Bax/Bcl-2比例明显减少(P<0.05)。 (2) 动物实验：与空白组相比，模型组DA神经元明显减少，DA及其代谢产物均减少，大鼠运动协调能力明显下降，COX-2, IL-1β和TNF-α蛋白的表达升高；经ICA处理后，DA神经元增多，大鼠运动协调能力有所提高；经L-DOPA处理后，DA神经元和大鼠运动协调能力没有变化，AIM评分和前肢运动功能明显增加；经ICA联合L-DOPA处理后，DA神经元明显增多，大鼠运动协调能力明显增强，AIM评分显著下降，前肢运动功能有所增加，COX-2, IL-1β和TNF-α蛋白表达减少(P<0.05)。 结论：ICA联合L-DOPA对6-OHDA诱导的PD大鼠有保护作用，ICA对长期服用L-DOPA所致的异动症有改善作用。

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