当归有效部位调节人脐静脉内皮细胞自噬抗动脉粥样硬化研究

摘要

目的： 研究当归有效部位如何通过调节人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）自噬流水平，发挥抗动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）作用。 方法： 1.当归不同用药部位阿魏酸（ferulic acid，FA）含量比较：高效液相色谱法（High performance liquid chromatography，HPLC）检测当归头、当归身、当归尾中FA含量，色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm×200 mm，5μm）；流动相：乙腈：0.1%磷酸(17∶83)；流速：1.0 mL/min；进样量：20μL；柱温：35℃；检测波长：316 nm。2. HUVECs分离培养：胶原酶消化法分离HUVECs ，用光镜、VWF(F8)因子相关抗原免疫荧光染色法进行细胞鉴定。3.ox-LDL对HUVECs自噬及炎症的影响：不同浓度氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL）（0 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、60 mg/L、80 mg/L）在不同时间（0 h、12 h、24 h、48 h）处理HUVECs ，Western Blot检测自噬标记蛋白LC3II、p62及炎症相关蛋白MCP-1、VCAM-1、LOX-1的表达；透射电镜（transmission electron microscope，TEM）观察HUVECs内自噬小体的形成情况。4.当归有效部位（有机酸）和FA调节HUVECs自噬及抗炎作用观察：给予FA、当归有效部位（有机酸）、ox-LDL处理HUVECs后，Western Blot检测自噬标记蛋白LC3II、p62及炎症相关蛋白MCP-1、VCAM-1、LOX-1的表达；TEM观察HUVECs内自噬小体的形成情况。 结果： 1.当归尾中FA含量最高，其次是当归头，当归身中FA含量最低。2.分离的HUVECs在光镜下为椭圆形或长梭形，呈铺路石状排列；TEM观察到细胞浆中有内皮细胞特异性标志W-P小体；免疫荧光染色检测为阳性。3.Western Blot结果显示ox-LDL以剂量(0 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、60 mg/L、80 mg/L)依赖增加MCP-1、VCAM-1、LOX-1、LC3II、p62蛋白的表达，p62在24 h时表达明显；TEM结果显示ox-LDL的浓度为40 mg/L时自噬小体数量最多。4.当归有效部位（有机酸）和FA均能增加LC3II表达，降低p62、MCP-1、VCAM-1、LOX-1蛋白的表达；TEM结果显示当归有效部位（有机酸）促进细胞自噬溶酶 体中细胞器降解。 结论： 当归有效部位（有机酸）通过增强细胞自噬流，减轻炎症反应保护内皮细胞，发挥抗AS的作用。其中起主要作用的成分是FA。

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