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缩略词表
第一章 引言
1.1 盐胁迫研究的必要性
1.2 盐胁迫下氯离子转运的研究
1.2.2 Cl-毒性
1.2.5 植物减轻Cl-毒性的植物生理学机制
1.2.7 介导Cl-木质部装载的两条通路
1.2.8 NPF2.4和SLAH1/SLAH3介导的Cl-转运有待进一步研究
1.3 NPF2.4和SLAH1基因的表达受到盐胁迫和ABA抑制的机制有待进一步研究
1.4 CRISPR/Cas9基因编辑技术
1.4.1 CRISPR/Cas9基因编辑技术的基本原理
1.4.2 CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用
1.4.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术存在的问题
1.5 本研究课题的目的和意义
第二章 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验种子
2.1.2 质粒载体和菌株
2.2 实验药品试剂
2.3 实验仪器设备
2.4 实验方法
2.4.1 土培法种植拟南芥
2.4.2 水培法培养拟南芥
2.4.3 MS固体培养基配制
2.4.4 LB培养基配制
2.4.5 抗生素配制
2.4.6 DNA提取
2.4.7 质粒DNA提取
2.4.8 植物总RNA提取
2.4.9 反转录
2.4.10 叶绿素提取
2.4.11 大肠杆菌感受态细胞制备及转化
2.4.12 农杆菌感受态细胞GV3101制备及转化
2.4.13 CRISPR/Cas9基因编辑技术
2.4.14 农杆菌介导转化拟南芥
2.4.15 杂交
2.4.16 ABA储存液的配制
2.4.17 PEG储存液的配制
2.4.18 叶片表皮毛分叉数的统计
2.4.19 Cl-含量测定
2.5 实验引物
2.5.1 基因型鉴定引物
2.5.2 基因编辑引物
2.5.3 RT-PCR引物
第三章 实验结果
3.1 CRISPR/Cas9基因编辑技术制备npf2.4和slah1突变体
3.1.1 CRISPR/Cas9表达载体的构建
3.1.2 阳性植株的基因型鉴定
3.1.3 阳性植株中缺失序列的测序
3.1.4 基因敲除突变体的表达量检测
3.2 npf2.4slah1双突变体和npf2.4slah1slah3三突变体的制备
3.3 盐胁迫下测定突变体叶中的Cl-含量
3.3.2 土壤培养条件下测定突变体叶中的Cl-含量
3.4 npf2.4-2抗性生理分析
3.4.1 ABA或PEG处理对npf2.4-2种子萌发率的影响
3.4.2 盐胁迫、ABA或PEG处理对npf2.4-2幼苗主根长度的影响
3.5 NPF2.4和SLAH1的表达调控模式
3.6 npf2.4-4表型观察和遗传学上的初步分析
3.6.1 npf2.4-4种子的体积和重量增大
3.6.2 npf2.4-4在生长发育过程中叶、茎和花的表型
3.6.3 npf2.4-4表皮毛的数量减少和分叉数增多
3.6.4 npf2.4-4晚期的叶绿素含量比WT多
3.7 生物信息学分析
3.7.1 NPF2.4和SLAH1启动子顺式作用元件预测
3.7.2 NPF2.4和SLAH1蛋白质磷酸化位点分析
3.7.3 NPF2.4和SLAH1蛋白互作预测
第四章 小结与讨论
参考文献
致谢
