角质细胞生长因子在大肠杆菌中的表达、纯化及生物学活性研究

摘要

该文在原有工作的基础上,对工程菌的诱导表达条件、产物的纯化及生物学活性进行探讨,为建立规模化生产KGF的下游技术提供科学依据.采用分批培养,对工程菌表达融合蛋白GST-KGF的条件进行研究.针对融合蛋白与还原型谷胱苷肽(GSH)和肝素具有特异性的亲和力,我们采用GSH-Sepharose4B和Heparin-SepharoseCL-6B两种凝胶,运用两步亲和吸附法纯化GST-KGT.在建立小鼠角膜上皮细胞原代培养方法的基础上,我们以小鼠角膜上皮细胞作为靶细胞,采用MTT法对KGF体外促细胞增殖活性进行检测.采用小鼠烫伤模型对KGF促进伤口愈合作用进行研究.

目录

文摘

英文文摘

前言

1.1生长因子与创伤修复

1.2 KGF的研究进展

1.3重组人KGF的研究概况

1.4本文的研究目的与内容

材料与方法

2.1材料

2.2方法

结果与分析

3.1表达质粒的酶切鉴定

3.2融合蛋白GST-KGF的诱导表达

3.3融合蛋白GST-KGF诱导表达条件的研究

3.4表达产物的纯化

3.5表达产物的免疫学活性

3.6重组人KGF对小鼠角膜上皮细胞促增殖作用

3.7重组人KGF对小鼠烫伤面愈合的促进作用

讨论

4.1融合蛋白质GST-KGF的表达

4.2融合蛋白质GST-KGF的纯化

4.3 KGF生物学活性的检测

结论与展望

5.1结论

5.2今后工作展望

参考文献

致谢