太子参中有效成分的分离纯化、结构鉴定、及其指纹图谱研究

摘要

本论文以中药太子参为研究对象,对太子参有效成分的提取分离、结构表征以及太子参指纹图谱进行了系统研究,取得了令人满意的结果。该研究对中药材太子参GAP的研究和质量控制具有指导意义和应用价值。本文主要研究结果简述如下：1.建立了苯酚-硫酸比色方法,对福建柘荣太子参GAP基地不同时间采收的柘荣太子参样品的多糖含量进行了动态分析,探讨了其动态积累规律,初步确定了该基地太子参的最佳采收时间,为太子参的合理采收提供了科学依据。2.建立了太子参中氨基酸的高效液相色谱检测方法。用邻苯二甲醛(OPA)、氯甲酸芴甲酯(FMOC)联合柱前衍生反相高效液相色谱测定太子参中的17种氨基酸。详细考察了样品的水解、样品的衍生、柱温对测定的影响,确定了高效液相色谱测定太子参中氨基酸的最佳色谱条件。结果表明该方法快速,高效,灵敏度高,适宜于药材中氨基酸含量的测定。3.建立了高速逆流色谱(HSCCC)分离纯化太子参指标成分太子参环肽Pseudostellarin B的简便有效的新方法。通过试验优化了HSCCC的分离参数。结果表明：可用溶剂系统的上相作溶样溶剂,一次进样量以不超过60mg为宜。在优化的条件下,一次分离,可得4个峰,经HPLC检测,太子参环肽Pseudostellarin B为最主要峰,纯度达96%以上,可作为药物标准品用于分析测试或药理与毒理研究。经TOF-MS, 1H-NMR, 13C-NMR , 1H-13C-COSY对该化合物结构的表征,确认为太子参环肽Pseudostellarin B。该制备方法与HPLC制备方法相比,具有溶剂系统既是固定相又是流动相,廉价易得,可随时更换调整,不需要特殊的要求,样品制备量大,且不存在色谱柱污染的优点。4.本研究工作首次建立了太子参中太子参环肽Pseudostellarin B的高效液相色谱测定方法及高效液相色谱/质谱联用技术分析太子参中的环肽类化合物的分析方法。详细考察了太子参环肽Pseudostellarin B及太子参中的环肽类化合物的提取方法、温度和时间对Pseudostellarin B提取率的影响,采用对照品和飞行时间质谱(TOF-MS)方法对其进行了定性分析。在优化的色谱条件下,太子参环肽Pseudostellarin B的色谱峰与其它干扰组份可快速、有效分离,且测定方法的精密度、重现性及线性关系良好,回收

目录

摘要

Abstract

第一章 绪论

1 太子参研究进展

1.1 太子参概述

1.2 太子参中的化学成分

1.3 药理作用

2 高速逆流色谱分离分析技术(HSCCC)

2.1 高速逆流色谱分离分析技术(HSCCC)简介

2.2 高速逆流色谱仪及溶剂体系简介

3 中药指纹图谱概述

3.1 中药指纹图谱简述

3.2 指纹图谱主要研究方法和应用

3.3 中药指纹图谱的检测方法

3.4 中药指纹图谱的研究近况

4 中药无机元素测定

4.1 中药无机元素测定研究概述

5 本论文研究目标

参考文献

第二章 太子参多糖和氨基酸含量测定

2.1 引言

2.2 太子参多糖含量测定

2.3 实验部分

2.3.1 材料与试剂

2.3.2 仪器与设备

2.3.3 实验方法

2.4 结果与讨论

2.4.1 最大吸收波长的确定

2.4.2 重现性试验结果

2.4.3 稳定性试验结果

2.4.4 加样回收率试验结果

2.4.5 不同采收期太子参中多糖含量的比较

2.5 太子参氨基酸含量测定

2.6 实验部分

2.6.1 仪器与试剂

2.6.2 样品处理

2.6.3 样品衍生

2.6.4 色谱条件

2.6.5 工作曲线的绘制

2.7 结果与讨论

2.7.1 供试品液相色谱分离情况

2.7.2 精密度

2.7.3 回收率实验

2.7.4 pH 值对本法的分析结果的影响

2.7.5 太子参中氨基酸的含量测定结果

2.8 本章小结

参考文献

第三章 太子参指标成分的高速逆流色谱分离纯化研究

3.1 前言

3.2 实验部分

3.2.1 材料和仪器

3.2.2 实验方法

3.3 结果与讨论

3.3.1 溶剂系统选择

3.3.2 HSCCC 分离参数的确定

3.3.3 太子参环肽Pseudostellarin B 化合物的结构鉴定

3.4 本章小结

参考文献

第四章 太子参环肽 Pseudostellarin B含量的 RP-HPLC测定及高效液相色谱/质谱分析太子参中环肽类化合物

4.1 引言

4.2 太子参环肽Pseudostellarin B 含量的RP-HPLC 测定

4.3 实验部分

4.3.1 材料与试剂

4.3.2 仪器与设备

4.3.3 实验方法

4.4 结果与讨论

4.4.1 供试品液相色谱分离情况

4.4.2 Pseudostellarin B 色谱峰的确认

4.4.3 回归方程和线性范围

4.4.4 方法学考察

4.4.5 太子参环肽Pseudostellarin B 的含量测定结果

4.5 高效液相色谱/电喷雾飞行时间质谱分析太子参中环肽类化合物

4.5.1 仪器与试剂

4.5.2 样品溶液的制备

4.5.3 HPLC 色谱分离条件

4.5.4 HPLC/ESI-TOFMS 条件

4.5.5 结果与讨论

4.6 高效液相色谱/大气压化学电离质谱分析太子参中环肽类化合物

4.6.1 仪器与试剂

4.6.2 样品溶液的制备

4.6.3 HPLC 色谱分离条件

4.6.4 HPLC/APCI/ MS 条件

4.6.5 结果与讨论

4.7 太子参中环肽Pseudostellarin B 化合物含量

4.7.1 样品溶液的制备

4.7.2 HPLC 色谱分离条件

4.7.3 HPLC/APCI/ MS 条件

4.7.4 回归方程、线性范围和检出限

4.7.5 方法学考察

4.7.6 太子参环肽Pseudostellarin B 的含量测定结果

4.8 本章小结

参考文献

第五章 太子参指纹图谱研究

5.1 前言

5.2 实验部分(太子参样品HPLC、HPLC-TOF-MS 指纹图谱建立)

5.2.1 材料与试剂

5.2.2 仪器与设备

5.2.3 实验方法

5.3 结果与讨论

5.3.1 提取条件的优化

5.3.2 不同波长的选择

5.3.3 梯度洗脱程序的建立

5.3.4 色谱柱与流速对分离的影响

5.3.5 色谱条件的优化

5.3.6 精密度和重现性

5.3.7 样品的稳定性考察

5.4 不同产地太子参样品HPLC 指纹图谱建立

5.4.1 峰匹配及差异性评价

5.4.2 相似度分析

5.4.3 聚类分析

5.5 不同品种、不同采收期太子参样品HPLC-TOF-MS 指纹图谱建立

5.5.1 峰匹配及差异性评价

5.5.2 相似度分析

5.5.3 聚类分析

5.5.4 HPLC-TOF-MS 分析太子参样品中的环肽类化合物

5.6 太子参样品元素指纹图谱建立

5.6.1 材料与试剂

5.6.2 仪器与设备

5.6.3 实验方法

5.6.4 结果与讨论

5.6.5 不同产地太子参的因子分析和聚类分析的结果

5.6.6 聚类分析

5.7 太子参样品近红外光谱指纹图谱建立

5.7.1 实验设备与样本

5.7.2 训练集的制备

5.7.3 结果与讨论

5.8 本章小结

参考文献

第六章 结论与创新

6.1 结论

6.2 研究的创新之处

6.3 研究展望

附录 1: 太子参环肽 Pseudostellarin B 的 NMR 图谱

附录 2: 攻读博士期间已发表和待发表的论文

致谢