单克隆抗体联合供者特异性输注抑制记忆性T细胞介导的加速性移植排斥的研究

摘要

目的：供者反应性记忆性T细胞(memory T cells，Tm)介导加速性排斥反应，是诱导移植物耐受的主要障碍。本研究利用封闭性单克隆抗体anti-CD44、anti-CD70、anti-CD154、anti-LFA-1和供者特异性输注(DST)对Tm介导的加速性排斥反应进行治疗，比较不同用药组合对移植物的保护作用，寻找最佳治疗方案并探索该方案的作用机制。
　　 方法：分离同种异体皮肤移植的预致敏小鼠脾脏CD4+Tm，构建CD4+Tm过继转移裸鼠心脏移植模型。在裸鼠心脏移植模型上首先验证CD44阻断对CD4+Tm的抑制作用。之后从同种异体皮肤移植的预致敏小鼠脾脏分离预致敏T细胞，构建供者反应性预致敏T细胞过继转移小鼠心脏移植模型，在该移植模型上，利用anti-CD44、anti-CD70、anti-CD154、anti-LFA-1以及DST的不同组合治疗Tm介导的加速性排斥反应，观察移植物生存期的改变，从移植物和模型鼠两个角度探讨联合用药方案的作用机制；
　　 结果：在过继转移CD4+Tm的裸鼠心脏移植模型中，对照组移植物平均生存期(MST)为6 d，术后当天单次应用anti-CD44组平均生存期平均为10.3 d，间隔4 d注射组(共应用8次)平均生存期为>100 d。与对照组相比，CD44阻断使移植物和受体鼠体内中IL-2和IFN-γ的基因表达量显著下降，同时使IL-10、TGF-β和Foxp3基因的表达量增加；CD44阻断降低受体鼠脾和淋巴结中CD4+Tm的比例，增加调节性T细胞(Tregs)比例。分离的预致敏T细胞中同时存在CD4+和CD8+Tm，具有介导加速性排斥反应的功能。在预致敏T细胞过继转移小鼠心脏移植模型上，对照组平均生存期为5.5 d；Anti-CD154/LFA-1组的平均生存期为21.5 d；Anti-CD44/CD70组平均生存期为16 d；Anti-CD154/LFA-1/CD44组和anti-CD154/LFA-1/CD70组平均生存期分别为25.5 d和22.5 d；An-ti-CD154/LFA-1/CD44/CD70组的平均生存期为47.5d；anti-CD154/LFA-1/DST联合应用平均生存期为49.5 d，在此方案基础上联合加入anti-CD44/CD70可以诱导移植物平均生存期大于100 d。与对照和其它用药方案相比，Anti-CD154/LFA-1/CD44/CD70/DST治疗对效应性和Tm免疫应答的抑制作用最为显著；该方案可以显著降低受体鼠脾脏T细胞分泌IL-2，IFN-γ能力；抑制CD4+和CD8+Tm的增值，减少浸润移植物的CD8+T细胞数目和功能；增加受体鼠内IL-10和TGF-β的表达和脾脏中Tregs比例并可以维持其长期存活。
　　 结论：多次注射anti-CD44可以有效抑制CD4+Tm介导的移植排斥反应，anti-CD44的主要作用机制是阻止CD4+Tm的增殖及粘附，促进CD4+Tm的克隆清除。Anti-CD44/CD70联合可以有显著抑制受者脾脏中CD4+和CD8+Tm的增殖，但对效应T细胞应答抑制效果不佳。Anti-CD154/LFA-1/CD44/CD70可以延长移植物平均生存期但不能诱导移植物长期存活；Anti-CD44/CD70/CD154/LFA-1/CD44/CD70/DST治疗可以诱导移植物长期存活，这种治疗方案的作用机制是有效抑制效应及Tm应答，同时显著增强受体鼠体内Tregs的数量和功能，并维持其长期存活。