深海来源丝状真菌的分享、鉴定和活性筛选以及Et3-2化合物抗肿瘤机制的初步研究

摘要

长期以来,国内外学者对天然药物的开发主要集中在陆地生物资源上,20世纪60年代,随着陆生资源的枯竭,科研工作者把目光转向占地球表面积71％的海洋,开始了对海洋天然药物的研发。海洋微生物是海洋生物的重要成员,长期生活在低温、高压、黑暗、寡营养这样一个特殊的生态环境中,在物种组成、生态功能和代谢途径方面具有特异性和多样性。尤其是近几年从海洋微生物中分离到的结构新颖、具有特殊生物功能的活性化合物,成为新药开发的来源。
　　 本文第一部分对大洋21航次采集到的15个深海沉积物样品进行丝状真菌的分离鉴定,共获得到65株丝状真菌,按形态学归类,可将其归为27个类群。从每个类群中选取一株,采取分子生物学的方法对代表性真菌菌株进一步鉴定,将其归属于18个种,分属于子囊菌门中的五个纲。利用摇瓶发酵提取真菌的发酵粗提物,进行生物学活性的测定,其中5株表现出良好的细胞毒活性,7株对不同茶叶致病真菌显示良好的抑制活性,4株对指示细菌的抑制呈现阳性。
　　 本论文第二部分主要是分离提取微生物次级代谢产物,并采用差异蛋白质组学的方法初步研究其中的一个活性组分Et3-2的抗肿瘤作用机制。该菌是分离自深海希瓦氏属的一株耐嗜压菌,由本实验室分离,并命名为WP3,本实验对WP3次级代谢产物进行了分离纯化,获得抗肿瘤活性很强的化合物(-)-Praeruptorin A,该化合物对早幼粒白血病细胞HL60的IC50为5μg/ml。鉴于目前对该化合物抗肿瘤机制研究较少,本实验利用双向电泳的方法对HL60细胞的DMSO对照组、加药处理24h组以及加药处理48h组进行了差异蛋白点分析,共找到差异表达蛋白点41个,其中加药处理后有13个蛋白点下调,25个点上调,3个点只是在加药24h高表达。将其中23个点进行MAILDL-TOF/FOF-MS质谱分析鉴定,共得到17个可信结果(P＜0.05),利用uniprot(http://www.uniprot.org/)和Geneontology(http://www.geneonto-logy.org/)蛋白质数据库在线检索,并结合相关文献,分析这17个蛋白点的生物学功能,大致可以分为6类:与细胞骨架和运动相关的蛋白MYL-6,TPM4,ARPC5;与细胞内氧化压调节相关的蛋白PRDX2,SOD1,Dj-1;参与细胞凋亡的蛋白Galetin-1,TPT1,PSMB3,PSME3:维持细胞内离子平衡的相关蛋白CUTa,FTL;与细胞代谢相关的蛋白APRT,TALDO1,IPTA;与蛋白的翻译和修饰相关的蛋白质MRPL12,PFDN-1。