深海来源真菌Aspergillus versicolor次生代谢产物的研究

摘要

近几年来，随着人类对海洋生态系统的不断研究，海洋微生物-一种新型的抗肿瘤药物研究对象逐渐进入人们的视线。海洋微生物分布广，数量多，其次生代谢产物表现出十分广泛的生物学活性，包括抗肿瘤、抗病毒、抗菌、免疫抑制等。深海真菌由于处于高压、低温（部分区域为高温如热液口）、厌氧、极端pH梯度、高盐浓度、高金属浓度、无光照、寡营养、高卤素等特殊极端环境中，决定了其具有一些特异性的代谢途径和遗传背景，导致深海真菌的次生代谢产物具有化学结构奇特、新颖，生物活性多样等特点，这类次生代谢产物是寻找新型肿瘤药物的重要源泉。
　　 本论文中，选取从东太平洋三千米左右的深海沉积物中分离鉴定得到的一株具有细胞毒活性的曲霉菌Aspergillusversicolor作为研究对象。通过对Aspergillusversicolor进行大规模培养发酵，应用大孔吸附树脂、ODS柱层析、硅胶、制备HPLC等分离技术，对其次生代谢产物进行分离，得到22个化合物，并根据化合物的理化性质、核磁共振谱(1H-NMR,13C-NMR)及与文献报道对比鉴定了其化合物结构，分别为:苯甲酸正丁酯(1)，麦角甾醇(2)，角甾-6，22-二烯-3，5，8-三醇(3)，环-（异亮氨酸-缬氨酸）(4)，环-（脯氨酸-缬氨酸）(5)，对羟基苯乙醇(6)，对羟基苯甲酸(7)，3-羟基苯甲酸(8)，7，7-二（3-吲哚基）对甲酚(9)，3，3-二（1H-3-吲哚基）-2-吲哚酮(10)，黑麦酮酸F(11)，环-（脯氨酸-酪氨酸）(12)，环-（苯丙氨酸-脯氨酸）(13)，环-（丙氨酸-异亮氨酸）(14)，环-（丙氨酸-亮氨酸）(15)，氯霉素水解物(16)，环-（色氨酸-酪氨酸）(17)，环-（苯丙氨酸-酪氨酸）(18)，腺嘌呤核苷(19)，5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯(20)，7-苄氧基吲哚(21)，1，1,2-三甲基-1H-苯并[e]吲哚(22)。初步研究了温度对真菌Aspergillusversicolor次级代谢产物的影响。体外活性试验显示环二肽5，12，13，14，15不具有细胞毒活性。
　　 本文研究结果表明:开展深海微生物的次生代谢产物研究，对开拓海洋新资源，寻找新型的抗肿瘤药物具有重要的意义。

目录

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摘要

缩略语

第一章 前言

1．1 海洋抗肿瘤天然产物研究概况

1．2 从海洋微生物中寻找抗肿瘤药物的优势

1．3 海洋放线菌的抗肿瘤代谢产物的研究

1．4 海洋细菌的抗肿瘤代谢产物的研究

1．5 海洋真菌的抗肿瘤代谢产物的研究

1．6 论文研究的目的、内容和意义

参考文献

第二章 次生代谢产物研究

2．1 技术路线

2．2 材料、试剂与仪器

2．2．1 菌株

2．2．2 常用化学试剂

2．2．3 显色剂

2．2．4 色谱耗材

2．2．5 主要仪器

2．3 发酵与分离

2．3．1 发酵条件

2．3．2 发酵液的处理

2．3．3 分离流程

2．4 结果与分析

第三章 化合物结构解析

3．1 化合物结构鉴定

3．1．1 苯甲酸正丁酯(1)

3．1．2 麦角甾醇，(3b,22E)-ergosta-5,7,22-trien-3-ol(2)

3．1．3 角甾-6,22-二烯-3β,5α,8α-三醇(3)

3．1．4 环-(异亮氨酸-缬氨酸)(4)

3．1．5 环-(脯氨酸-缬氨酸)(5)

3．1．6 对羟基苯乙醇(6)

3．1．7 对羟基苯甲酸(7)

3．1．8 3-羟基苯甲酸(8)

3．1．9 7,7-二(3-吲哚基)对甲酚(9)

3．1．10 3,3-二(1H-3-吲哚基)-2-吲哚酮(10)

3．1．11 黑麦酮酸F(11)

3．1．12 环-(脯氨酸-酪氨酸)(12)

3．1．13 环-(苯丙氨酸-脯氨酸)(13)

3．1．14 环-(丙氨酸-异亮氨酸)(14)

3．1．15 环-(丙氨酸-亮氨酸)(15)

3．1．16 氯霉素水解物(16)

3．1．17 环-(色氨酸-酪氨酸)(17)

3．1．18 环-(苯丙氨醇-酪氨酸)(18)

3．1．19 腺嘌呤核苷(19)

3．1．20 5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯(20)

3．1．21 7-苄氧基吲哚(21)

3．1．22 1,1,2-三甲基-1H-苯并[e]吲哚(22)

3．2 小结与讨论

参考文献

第四章 温度对Aspergillus versicolor次级代谢产物的影响

4．1 发酵与分离

4．1．1 发酵条件

4．1．2 发酵液的处理

4．1．3 分离流程

4．2 结果与分析

第五章 化合物的生物活性研究

5．1 实验材料

5．1．1 样品

5．1．2 肿囊细胞株

5．1．3 常用微生物及肿瘤细胞培养基

5．2 方法

5．2．1 肿瘤细胞的培养

5．2．2 环二肽的细胞毒活性测定(SRB法)

5．3 结果与分析

参考文献

第六章 结论与展望

1．结论

2．展望

附录

致谢