油酰乙醇胺治疗非酒精性脂肪肝及肝纤维化的机制研究

摘要

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是常见的慢性肝病，现在已经影响到全世界25-30％的人口，发生时主要表现为肝脏细胞内的大量脂滴蓄积，并伴随着肥胖，2型糖尿病，高血脂以及胰岛素耐受等代谢性综合症的主要病理表现。目前临床上对NAFLD的治疗，主要集中在控制其伴随发生的各种代谢性综合症，降低心血管疾病的发生风险。饮食控制、锻炼身体、胰岛素增敏药、抗氧化药、降脂药在NAFLD的治疗中都扮演着重要角色。
　　NAFLD以及其他一些慢性肝病，如病毒性肝炎、自身免疫性肝病等在得不到有效控制的情况下，会发展为肝纤维化，肝纤维化是指肝脏自身对慢性肝损伤产生的一种应激修复反应，主要表现为细胞外基质蛋白(ECM)大量沉积，进而生成纤维疤痕破坏肝脏结构，当前临床对肝纤维化的治疗方式较为匮乏，但近几年肝纤维化发病机制已经明确，主要是肝星状细胞(HSC)活化为成纤维细胞后大量分泌胶原蛋白所致，因此目前可以有针对性地研究更好的治疗策略来抑制或逆转肝纤维化的发生。
　　天然脂质油酰乙醇胺(OEA)可通过激活PPAR-α调控脂肪酸代谢，控制炎症发生，对肥胖、动脉粥样硬化等疾病具有良好的改善作用，认为OEA也能对非酒精性脂肪肝和肝纤维化发挥很好的治疗作用，为证实假设，本研究实验部分共分两章（第二章、第三章），分别研究了OEA对非酒精性脂肪肝的治疗作用和机制以及OEA对肝纤维化的治疗作用和机制，具体如下:
　　第二章通过高脂饮食(HFD)诱导的SD大鼠非酒精性脂肪肝病（NAFLD）模型， OEA表现出降低肝脏脂滴蓄积，减少血浆中TG、TC、ALT和AST含量，下调肝脏组织与血浆中炎症因子TNF-α和IL-6的水平等作用，缓解了非酒精性脂肪肝病的发生发展。进一步对肝脏内相关脂肪酸和脂代谢基因的检测发现，OEA通过激活PPAR-α，升高CPT1和ECHS1的基因表达水平，从而促进脂肪酸β氧化;上调adipoR2和OB-Rb的mRNA水平，改善胰岛素抵抗;动物模型还可观察到肝脏内SCD-1的表达和活性显著下降，丽阳性对照非诺贝特则表现出显著升高SCD1表达的趋势，这一点可能是安全性优于非诺贝特的主要原因。研究结果表明，OEA对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝具有改善作用，并且与非诺贝特相比更具有效性和安全性。
　　第三章通过TGF-β体外诱导的HSC活化模型，OEA表现出可以通过PPAR-α抑制HSC活化，降低肝星状细胞分泌的纤维化基因α-SMA、Col1a、CTGF表达水平，抑制Smad2/3蛋白磷酸化，下调WNT通路中β-catenin蛋白和Axin-2基因表达水平;通过硫代乙酰胺(TAA)和蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食分别诱导129S小鼠和PPAR-α基因敲除小鼠建立的肝纤维化体内模型，OEA表现出减少小鼠肝脏中纤维胶原蛋白沉积，抑制肝星状细胞激活，降低炎症因子ICAM和VCAM表达水平，逆转纤维化基因TGF-β、Col1a和Col3a过度表达，且这些作用都被证实是由PPAR-α所介导。研究结果表明，OEA可以通过PPAR-α抑制肝星状细胞活化，改善由肝细胞损伤和脂质环境紊乱诱导的肝纤维化的发生。

目录

声明

英文缩略词

摘要

第一章 前言

第一节 非酒精性脂肪肝病病因与治疗策略

1．非酒精性脂肪肝发病原因-二次打击学说

2．非酒精性脂肪肝病的治疗措施

第二节 肝纤维化发生机制与治疗策略

1．肝纤维化发病机制

2．肝纤维化治疗策略

第三节 核受体PPAR-α

1．PPAR结构与常见配体

2．PPAR-α生理功能

第四节 OEA概述

1．OEA的合成与降解

2．OEA在体内的分布及其含量

3．OEA的生理功能

第五节 本研究的目的和科学意义

参考文献

第二章 OEA对非酒精性脂肪肝病的调节作用及作用机制

前言

第一节 OEA对高脂饮食诱导的NAFLD的治疗作用与机制

前言

材料与方法

结果

讨论

第二节 OEA在体外细胞模型中对脂代谢相关基因的调节作用

前言

材料与方法

结果

讨论

第三节 OEA和非诺贝特在NAFLD模型中的作用对比

前言

材料与方法

结果

讨论

本章小结

参考文献

第三章 OEA对肝纤维化的调节作用及作用机制

前言

第一节 OEA对不同来源肝星状细胞纤维化基因的调控作用

前言

材料与方法

结果

讨论

第二节 PPAR-α介导了OEA对肝星状细胞活化的抑制作用

前言

材料与方法

结果

讨论

第三节 OEA对TGF-β1／Smad通路的调控作用

前言

材料与方法

结果

讨论

第四节 OEA对WNT通路的调控作用

前言

材料与方法

结果

讨论

第五节 OEA对TAA诱导的肝纤维化小鼠模型的调控作用

前言

材料与方法

结果

讨论

第六节 OEA对MCD饮食诱导的肝纤维化小鼠模型的调控作用

前言

材料与方法

结果

讨论

本章小结

参考文献

全文结论

附录

致谢