白介素-1受体Ⅱ型和受体辅助蛋白对自身免疫性心肌炎的作用及其机制研究

摘要

目的：白介素-1(IL-1)是一种T淋巴细胞激活因子，大量研究报道，在心肌炎急性期表达量明显升高。白介素1受体Ⅱ型（IL-1RⅡ）可以招募白介素1受体辅助蛋白（IL-1RAcp），从而拮抗IL-1β的作用。本课题目的为评估IL-1RⅡ和IL-1RAcp的重组质粒对大鼠自身免疫性心肌炎(EAM)的作用，并进一步探讨其机制，为心肌炎的临床治疗提供理论基础。
　　方法：首先在临床实验中，我们选取厦门市心血管病医院诊断明确的心肌炎住院患者28例，应用bio-plex蛋白芯片技术检测其血浆内15种炎性因子的表达;在体内实验，第0天免疫Lewis大鼠建立EAM模型，并在第10天导入重组质粒pCAGGS-IL-1RⅡ和pCAGGS-IL-1RAcp-Ig，第21天处死大鼠并评估其治疗效果;在体外实验，Lps诱导H9C2细胞（大鼠心肌成纤维细胞），并给予含IL-1RⅡ/IL-1RAcp蛋白的血浆，评估炎症因子的表达情况。
　　结果：1、心肌炎患者血浆中的IL-1β表达量较正常人显著升高，表明IL-1β在心肌炎急性期发挥重要作用;2、体内动物实验显示，与IL-1RⅡ治疗组相比，IL-1RⅡ+IL-1RAcp重组质粒同时导入组明显降低大鼠心/体重比值、BNP及炎性细胞因子的表达，同时升高抗炎因子的表达，大鼠的心功能也较IL-1RⅡ单独治疗组明显改善;3、体外细胞实验显示，含IL-1RⅡ/IL-1RAcp蛋白的血浆对Lps诱导的炎症刺激较含单独IL-1RⅡ蛋白的血浆有更明显的降低炎性细胞因子的作用，及升高抗炎细胞因子的作用。
　　结论：与IL-1RⅡ-Ig单独治疗心肌炎相比， IL-1RⅡ-Ig和IL-1RAcp-Ig重组质粒同时导入可以明显减轻心肌炎的炎症程度，并明显改善心功能。其作用机制可能与降低炎性因子的表达及升高抗炎因子的表达有关，从而减轻心脏炎症反应。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 心肌炎

1．1．1 心肌炎介绍

1．1．2 心肌炎的病理过程及免疫机制

1．2 白细胞介素1

1．2．1 IL-1家族成员

1．2．2 IL-1家族相关受体

1．2．3 IL-1相关信号通路

1．2．4 IL-1对免疫细胞的调节作用

1．3 实验性自身免疫性心肌炎(EAM)动物模型

1．4 IL-1在EAM中的作用

第二章 实验材料

2．1 实验动物

2．2 主要试剂

2．3 实验设备及耗材

2．4 主要溶液的配置

第三章 实验方法

3．1 临床实验

3．1．1 心肌炎患者临床病例资料的分析

3．1．2 心肌炎患者炎性因子的检测

3．2 体内实验

3．2．1 大鼠EAM模型的建立

3．2．2 重组质粒的构建

3．2．3 重组质粒的体内导入

3．2．4 重组质粒的治疗效果的评估

3．3 体外实验

3．3．1 体外细胞水平治疗效果的评估

3．3．2 重组质粒PCDH-IL-1RII-Flag／PCDH-IL-1RAcp-HA的转染

3．3．3 数据统计分析

第四章 实验结果

4．1 临床实验

4．1．1 心肌炎患者的临床基本情况

4．1．2 应用蛋白芯片技术检测炎性因子的表达

4．2 体内实验

4．2．1 EAM时程的检测

4．2．2 重组质粒的构建

4．2．3 重组质粒体内导入后的浓度测定

4．2．4 重组质粒对大鼠EAM的治疗作用评估

4．3 体外实验

4．3．1 细胞水平的治疗作用评估

4．3．2 免疫共沉淀鉴定IL-1RII／IL-1RAcp异源二聚体的形成

第五章 讨论

附录

参考文献