MAPK信号通路在氯化镉诱导星形胶质细胞凋亡中作用的初步研究

摘要

目的：①体外分离、培养及鉴定星形胶质细胞；②研究氯化镉对体外培养的星形胶质细胞凋亡发生的影响；③探讨 MAPK信号通路是否参与了镉诱导星形胶质细胞的凋亡过程。
　　方法：①取新生24h内SD大鼠大脑皮质组织，采用恒温摇床的方法纯化星形胶质细胞，体外培养传至第三代，采用GFAP免疫细胞化学法鉴定星形胶质细胞;②以0、2.5、5、10、20、40μmol/L染毒12h、24h，MTT法测定氯化镉对星形胶质细胞的毒性作用；③以0、2.5、5、10、20、40μmol/L氯化镉染毒12h，倒置相差显微镜下观察细胞形态变化；④以20μmol/L氯化镉染毒12h（对照组为0μmol/L氯化镉的无血清DMEM作用12h），透射电镜观察星形胶质细胞超微结构变化；⑤以0、2.5、5、10、20μmol/L氯化镉染毒12h，Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率；⑥以0、2.5、5、10、20μmol/L氯化镉染毒12h,Western blot方法检测ERK磷酸化水平和ERK水平。
　　结果：①纯化后的星形胶质细胞，胞体大而扁，胞突丰富，初级胞突较多且长.细胞传两代后，经GFAP免疫细胞化学染色，阳性细胞胞浆和突起呈棕黄色，星形胶质细胞纯度达95％，可用于后续实验。②MTT法检测结果显示氯化镉对星形胶质细胞有一定的细胞毒性，镉浓度为2.5μmol/L时在各时间点（12h、24h)均未引起细胞存活率下降；细胞存活率在12h、24h时间点随着染毒剂量（5~40μmol/L）的逐渐增加而下降，与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01)。③倒置相差显微镜观察细胞形态变化：镉浓度为（0~5μmol/L）时，星形胶质细胞形态并未见到明显改变；10μmol/L时细胞突起变细变短，细胞间隙增大，细胞无脱落现象；20μmol/L时，胞体收缩，突起消失或成毛刺状，细胞稀疏，部分细胞收缩成球形，贴壁能力下降；40μmol/L时，细胞收缩成球形，大部分细胞脱壁，漂浮于细胞培养液中；④透射电镜观察结果：对照组：胞核形态规则，各细胞器形态正常；20μmol/L染毒12h:胞核形态不规则，核膜内陷，线粒体呈现空泡样变。⑤Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率结果：0、2.5、5、10、20μmol/L氯化镉作用12h,细胞凋亡率分别为2.47％，2.71％，4.74％，17.78％，30.51％，(5~20μmol/L)镉浓度时细胞凋亡率随着染毒剂量的增加而增加,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01)。⑥Western blot检测结果：(10、20μmol/L)氯化镉处理12h,ERK1/2磷酸化水平增加，与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）;而总ERK1/2无变化。
　　结论：①氯化镉对星形胶质细胞具有明显的毒性作用；②氯化镉可诱导星形胶质细胞凋亡；③MAPK通路参与了镉诱导星形胶质细胞凋亡过程。

目录

封面

目录

中文摘要

前言

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4结论

参考文献

英文摘要

致谢

英文缩略词表

声明

附：综述 镉致细胞凋亡的研究进展