复方灯盏花滴丸对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用研究

摘要

目的：研究复方灯盏花滴丸对氧化应激致大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（PC12细胞）损伤的保护作用，并探讨其可能的作用机制。
　　方法：培养PC12细胞，实验分为6组：空白对照组，氧化损伤组（模型组），复方灯盏花滴丸不同浓度组（0.763μg/mL、3.052μg/mL、12.207μg/mL），阳性药组（维生素E4.307μg/mL），药物干预24h后，除空白对照组外，其余各细胞组用300μmol/L过氧化氢（H2O2）诱导PC12细胞损伤2h，进行相关指标检测：（1）倒置显微镜下细胞形态学观察；（2）线粒体琥珀酸脱氢酶（MTT）检测细胞存活率；（3）光化学法测定细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放的测定；（4）黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性以及硫代巴比妥法测定丙二醛（MDA）含量；（5）一氧化氮(NO)含量检测以及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性测定；（6）Annexin V-FITC/PI双染法测细胞凋亡率；（7）免疫细胞化学法测定细胞色素C含量；（8）免疫细胞化学法测定caspase-3蛋白的表达。
　　结果：300μmol/L的H2O2损伤细胞2h可明显降低PC12细胞的增殖活性，增加LDH的外漏，提高细胞内MDA含量，降低SOD活性，增高NO含量，提高iNOS活性，增加细胞色素C的释放，提高caspase-3的表达，引起细胞凋亡，与空白对照组比较有统计学差异（P＜0.05），表明H2O2所致PC12细胞损伤模型复制成功；不同浓度的复方灯盏花滴丸可提高PC12的MTT吸光度值，减少细胞内LDH的外漏，减少MDA产生，增强SOD活性，减少NO的产生及降低iNOS活性，减少细胞色素C的释放，减少caspase-3的表达，抑制细胞凋亡，与模型组比较有显著性差异（P＜0.01）。
　　结论：复方灯盏花滴丸可对过氧化氢所致的PC12细胞的损伤有保护作用，能提高PC12细胞的存活率及改善其形态，减少氧化损伤、细胞凋亡，其作用机制可能包括：（1）稳定细胞膜；（2）增加清除氧自由基的能力，提高抗脂质过氧化能力；（3）减少NO的产生及抑制iNOS的活性；（4）减少细胞色素C的释放，抑制caspase-3的表达，干扰线粒体细胞凋亡信号转导途径从而抑制细胞凋亡。

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