细胞的不同培养密度及培养方式对肝癌细胞相关干细胞基因表达的影响

摘要

目的：
　　观察肝癌细胞（LM3、HepG2）在不同培养密度以及在不同培养方式条件下干细胞基因表达情况，进一步了解肝癌细胞的生存状态对肝癌干细胞与肝癌的关系，探讨肝癌发生的分子水平机制，为临床肝癌诊断及治疗提供有力依据。
　　方法：
　　第一部分：肝癌细胞在不同培养密度条件下干细胞相关基因的表达情况
　　采用人LM3、HepG2肝癌细胞系为模型细胞，常规细胞培养；通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测LM3、HepG2肝癌细胞在低（种植细胞数为1×107个/皿）、中（种植细胞数为2×107个/皿）和高（种植细胞数为3×107个/皿）等不同培养密度条件下，干细胞相关基因（Oct4、Sox2、Nanog和Wnt-5b）的表达情况。
　　第二部分：肝癌细胞在不同培养方式下干细胞相关基因的表达情况
　　采用人LM3肝癌细胞系为模型细胞，常规细胞培养（贴壁）以及微球体培养（悬浮）的方式；通过蛋白免疫印迹法（Western blot）分析LM3肝癌细胞在不同培养方式下干细胞相关基因（Oct4、Sox2、Nanog和Wnt-5b）的表达情况；采用免疫荧光细胞化学方法观察肝癌细胞 LM3在常规细胞培养以及微球体培养的方式下干细胞相关基因（Oct4、Sox2、Nanog和Wnt-5b）的表达情况。
　　结果：
　　1、相对于低密度培养条件，肝癌细胞LM3在中、高密度中培养时，干细胞相关基因（Oct4、Sox2和Wnt-5b）表达增强；而干细胞相关基因Nanog表达下调；
　　2、相对于低密度培养条件，肝癌细胞HepG2在中、高密度中培养时，干细胞相关基因（Oct4、Sox2和Wnt-5b）表达增强；而干细胞相关基因Nanog表达下调；
　　3、肝癌细胞LM3分别在常规培养（种植细胞数为2×107个）和微球体培养（种植细胞数为2×107个）中培养时，干细胞相关基因（Oct4、Sox2、Nanog和Wnt-5b）在微球体培养中表达显著高于在普通培养中的表达。
　　结论：
　　1、细胞的培养密度可影响LM3肝癌细胞的干细胞相关基因的表达；
　　2、细胞的培养密度可影响HepG2肝癌细胞干细胞相关基因的表达；
　　3、肝癌细胞LM3培养方式不同（悬浮和贴壁），干细胞相关基因的表达具有明显的差异。

目录

封面

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中文摘要

前言

材料与方法

1.实验材料

2.实验方法

结果

一、肝癌细胞LM3和HepG2不同种植密度的细胞图

二、肝癌细胞LM3在不同培养密度条件下干细胞相关基因的表达

二、肝癌细胞HepG2在不同培养密度条件下干细胞相关基因的表达

三、肝癌细胞LM3在微球体培养条件下的生长情况

四、肝癌细胞LM3在不同培养方式下干细胞相关基因的表达

讨论

结论

参考文献

英文摘要

致谢

英文缩略词表

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