选择性雌激素受体调节剂对SHSY5Y细胞神经毒性的保护作用及机制研究

摘要

阿尔兹海默氏（Alzheimer＇s disease,AD），也是老年痴呆症的另一种说法，该病是一种退行性的脑变性病。近几年来发现绝经期的女性人群中，AD患者数量远远多于男性，与男性相比，绝经后的妇女人群体内雌激素水平严重下降，因此有研究者提出是由于雌激素在体内的减少导致了 AD的发病。医学上也应用了雌激素补充治疗，发现对 AD确实有一定的效果。可是，雌激素补充治疗法需用药长达10年以上，且对子宫内膜有刺激作用，有可能导致乳腺癌。所以此刻找到治疗AD的有效果的药物迫在眉睫。 选择性雌激素受体调节剂(SERMs)，它与雌激素相似,通过与 ER结合而表现出神经保护作用,并在不同的系统中表现出雌激素激动剂或拮抗的作用,雌激素是通过影响 MAPK的信号机制调节细胞线粒体功能发挥神经保护的作用,因此我们推测，SERMs也是通过该信号通路发挥作用。这主要为治疗 AD找到一种有效的药物 本课题主要是为了研究第二代 SERMs代表药物雷洛昔芬(RLX)对神经细胞的保护作用及其机制。 第一部分 SERMs对神经细胞的保护作用 目的：研究第二代 SERMs雷洛昔芬(RLX)对 Aβ1-40作用的 SHSY5Y细胞的保护作用。 方法：通过培养SHSY5Y细胞并用全反式维甲酸（RA)诱导分化，予Aβ1-40处理后造成阿尔茨海默症模型，选定不同浓度的17β雌二醇，苯甲酸雌二醇和 RLX对其保护作用，并用Hoechst33258染色观察细胞凋亡。 结果：（一） Aβ处理可以引起细胞成活率的减少，导致细胞的凋亡增加； （二）雷洛昔芬 RLX与雌激素类似，可以增加 Aβ处理的细胞的活力，对神经细胞有保护作用，并减少其凋亡。 第二部分 SERMs对神经细胞的作用机制 目的：研究第二代 SERMs RLX对 Aβ1-40作用的 SHSY5Y细胞的机制研究，验证是否通过该通路来对SHSY5Y细胞发挥效应 方法：采用 ERK1/2抑制剂 PD98059，p38MAPK抑制剂和 JNK抑制剂CEP1347处理AD模型细胞，通过MTT,CCK8，JC-1试剂盒染色，然后在荧光显微镜观察，以及用Western Blot蛋白检定分析技术 结果：发现Aβ1-40诱导的SHSY5Y细胞 p38MAPK和JNK的活化会导致细胞线粒体途径的凋亡，并且存在某方面的协同作用。而 RLX可以由 ERK信号通路来保护SHSY5Y，并抑制 p38MAPK和JNK途径的活化，最终减少细胞凋亡。

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第1章 引言

1.1 阿尔兹海默症

1.2 阿尔茨海默症的发病病因及各种发病学说的研究

1.2.1基因学说

1.2.2胆碱能学说

1.2.3钙代谢紊乱学说

1.2.4β－淀粉样蛋白学说

1.2.5其他学说

1.3阿尔茨海默症的治疗

1.3.1抗炎治疗

1.3.2抗氧化治疗

1.3.3胆碱脂能系统药物

1.3.4抗淀粉样蛋白治疗

1.3.5雌激素替代疗法

1.3.6 SERMs疗法

1.4 SERMs对神经细胞作用机制的研究进展

1.4.1丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）

1.4.2线粒体膜通道

1.5全反式维甲酸

1.5.1 定义

1.5.2 药理毒理作用

1.6本课题的研究内容

1.7本课题研究的意义

第2章实验部分

第一部分RLX对Aβ1-40诱导SHSY5Y神经细胞的保护作用研究

2.1实验材料

2.2 实验方法

2.3实验结果

2.4讨论

2.5小结

第二部分 RLX对SHSY5Y细胞作用的机制研究

2.6实验材料

2.7实验方法

2.8 实验结果

2.9讨论

2.10 小结

第3章 结论

3.1研究总结

3.2研究展望

参考文献

致谢

个人简历